| 研究課題/領域番号 |
12670722
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
大浦 敏博 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (10176828)
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| 研究分担者 |
呉 繁夫 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (10205221)
根東 義明 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (00221250)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2001年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2000年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | ファンコニ・ビッケル症候群 / 糖原病XI型 / ドミナントネガテイブ効果 / 腎性糖尿 / トランスジェニックマウス / GLUT2 / Cre loxP system / ファンコニービッケル症候群 |
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| 研究概要 |
1.Fanconi-Bickel症候群3家系のGLUT2遺伝子解析。家系1にはエクソン9に423番目のValがGluとなる変異がホモ接合でみられた(V423E)。家系2にはイントロン2のスプライスアクセプター部位のagがggとなる変異がホモ接合でみられた(IVS2-2A→G)。家系3はエクソン6のストップコドンとなるQ287X変異と、エクソン8のL389P変異の複合ヘテロ接合体であった。
2.家系1の父、母、兄(いずれもV423Eのヘテロ接合体)、家系3の父(Q287Xのヘテロ接合体)、母(L389Pのヘテロ接合体)にOGTTをおこなった。血糖のパターンは家系1の母が境界域だったほかは、正常であった。家系1の父、母、兄、家系3の母に負荷後尿糖が認められた。家系3の父は尿糖陰性であった。ミスセンス変異のヘテロ接合体に腎性糖尿が認められたことにより腎性糖尿の発症にGLUT2のドミナントネガテイブ変異の関与が示唆された。
3.ドミナントネガテイブ効果を持つ変異GLUT2cDNAを利用した機能的ノックアウトマウスの作成。まずヒト肝組織から正常GLUT2cDNAをクローニングし、次にV423E変異(1580T>A)をもつ変異cDNAを作成した。このプラスミドからDNAを切り出し発現ベクター(CDRE-GLUT2:CAG-loxP-DsRed-loxP-IRES-EGFP配列を持つ)に挿入し、マウスC57BLの受精卵に顕微注入した。この内状態のよい卵をマウスに移植したところ32匹のマウスを得ることが出来た。この内、8匹のマウスが目的の遺伝子(CDRE-GLU2)を持つトランスジェニックマウスであった。今後、Cre transgeneをもつマウスと交配させ、変異GLUT2を過剰発現するマウスを作成し、尿糖等の症状を発現するマウスが得られるかざうか検索する予定である。目的とするtransgenic mice得られればV423E変異がドミナントネガテイブ効果を持つ変異であることが明らかにされるだけで無く、本手法が機能的ノックアウトマウス作成に有用であることが証明される。
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