| 研究課題/領域番号 |
12670732
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
森尾 友宏 東京医科歯科大学, 医学部・附属病院, 助教授 (30239628)
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| 研究分担者 |
野々山 恵章 東京医科歯科大学, 医学部・附属病院, 助教授 (40280961)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2001年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2000年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | Ku70 / 80 / class switch / Fcε receptor / gene regulation / CD95 / IL-4R / CD40 / DNA-PK / IL-4 / CD23 / translocation / IgE |
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| 研究概要 |
(1)KuによるCD23、CD95遺伝子発現調節機構の解析 IL-4R/CD40刺激によりCD40に会合したKuが核内に移行する。同刺激によりCD23の発現は最大になる。またKuはCD23のイントロン内エンハンサーに会合する。以上より、KuはCD23の発現調節を担っている可能性がある。2つのKu80 dominant negative(DN)コンストラクトをEGFPとの融合タンパクの形で作成し、B細胞株に導入し、IL-4R/CD40刺激を加えたところ、C末端を欠くKu80を導入した細胞株でCD23の発現が抑制された。レポーター遺伝子アッセイによる解析では、Kuが会合するとされるエンハンサー領域は、その周辺部が存在することにより機能し、IL-4R/CD40刺激で最大限の発現が得られることが判明した。実際にそのエンハンサー領域へのKuの特異的結合の証明は不成功に終わっている。これらの結果はしかし、KuがB細胞において、CD23発現を調整している間接的な証左と考えている。CD95に関しては結合するプロモーター領域を決定した。
(2)Kuの修飾と機能の修飾 ストレス刺激が入るとKuのセリンプロテアーゼによるあるいは、ユビキチン化に引き続くdegradationが生じることが判明した。これが細胞のアポトーシスやアレルギー反応の停止に関与するかどうか検討中である。Ku70/80のチロシンリン酸化と核内移行の関係について検討するため、TOF-MSなどでチロシンリン酸化部位を同定した。実際に細胞質と核ではチロシンリン酸化の程度に差異があることも判明している。
(3)IgE産生に関与する核内転写因子のクローニング 研究を進める中で、AIDがクラススイッチに重要であるとの報告がなされ、16症例の女性の高IgM症候群患者でその異常を検討した。9例において変異が認められた。Kuとの関係についても検討中である。
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