| 研究課題/領域番号 |
12670736
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
上條 岳彦 信州大学, 医学部・附属病院小児科, 講師 (90262708)
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| 研究分担者 |
小池 健一 信州大学, 医学部・小児科, 助教授 (40143979)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2000年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
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| キーワード | ARF / p53 / がん抑制遺伝子 / 白血病 / アポトーシス / 癌抑制遺伝子 / ミトコンドリア / Bcl-2 / Bax / 綱羅的スクリーニング / DNAチップ |
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| 研究概要 |
1)ARFノックアウトマウスのリンパ球表面マーカーの検討
ARFノックアウトマウスの末梢血、および胸腺のリンパ球表面マーカーをFACSを用いて解析した。T細胞性表面抗原としてCD4,CD8,B細胞性表面抗原としてCD20,NK細胞性表面抗原としてCD16,CD56を解析したが、野生型マウスとARFノックアウトマウスとの間に有為な差は認められなかった
2)ARFノックアウトマウスの血液幹細胞の増殖能の検討
ARFノックアウトマウスの骨髄を採取し、無血清低酸素下培養法を用いて血液幹細胞のコロニーアッセイおよ体培養を行った。4週令のARFノックアウトマウスの血液幹細胞の増殖能、コロニー形成能はage-matched controlと比較して有意に差がなかった。
3)ARFによる細胞死誘導機構の検討
ARFはMDM2を不活化してp53の活性を増強することが知られているが、P53はアポトーシス関連遺伝子の発現調節を行う転写因子であることが知られている。アポトーシスは細胞のプログラムされた自殺機構として発生過程の器官形成、ウイルス感染やDNA傷害によってダメージを受けた細胞の除去に重要な生理的経路として認識されている。そこでARFノックアウトマウスにおける腫瘍の発症に細胞死誘導機構の失活が関与しているかを検討するために、ARFによる細胞死誘導の分子機構を検討した。ARF/p16-null細胞への導入実験によって、ARF-P53依存性にBcl-2が減少し、BaxはARF非依存性・p53依存性に血清除去で誘導されることが示された。ARF依存性アポトーシスはミトコンドリアからcytochrome cを細胞質に放出させ、ミトコンドリア膜電位を低下させた。またこのアポトーシスはカスペース阻害剤のz-VAD-fmkで阻害され、caspase9またcaspase3の活性化を伴っていた。以上の結果から、ARFはp53を介してanti-apoptotic蛋白であるBcl-2の発現を抑制し、血清除去によるpro-apoptotic蛋白であるBaxの発現増加と共調的にアポトーシスを誘導し、このアポトーシスはミトコンドリア依存性であることが示された
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