| 研究概要 |
1,心停止ドナー肝からの肝細胞分離法の開発および生肝細胞収量の増加法とバイアビリティ向上法の研究
(1)経門脈的潅流法:心停止前のヘパリン投与により充分抗凝固化された肝のみ潅流細胞分離が可能であった。ヘパリン化が不十分な肝臓からは、いかなる時間帯においても生細胞は得られなかった。トリパンブルー色素排泄試験におけるバイアビリティ(収量:生肝細胞数/湿肝臓重量)は、心停止時間0,30,60,90,120分でそれぞれ92.0%(1.2×10^7/wet liver),70.2(8.1×10^5),43.2(5.6×10^3),12.3(1.5×10^2),1.4(1.7×10)であった。
(2)多枝穿刺法:穿刺消化後も細胞塊として残り、心停止時間0分も含めあらゆる心停止時間においてバイアビリティのある細胞はほとんど得られなかった。
2,遊離肝細胞の精製
1-(1)の心停止後30分ドナーから採取された肝細胞(viability 70%)をPercollにて精製を試みたが、精製過程でほとんどの肝細胞が失われた。見かけ上トリパンブルー色素排泄試験陰性の細胞も、細胞膜には温阻血障害が起こっており精製過程の機械的刺激でmembrane leakyとなることが判明した。同時にこの細胞を精製せずにそのままMEM培養液内で培養すると、細胞膜にbudding様変化が起こっていた。また機能面では、NH_4Cl負荷で尿素合成能を検討するとコントロール(心停止時間0分の40.3μg/g・cell/hに対し11.5μg/g・cell/hと著明に低下していることが判明した。
生細胞収量増加目的でDBcAMPとクロールプロマジンなどのmembrane stabilizerの前投与による細胞保護効果と生細胞収量増加を検討したが、改善は認められなかった。現在の生肝細胞収量、viabilityでは、脾内移植による生着与困難であり、心停止ドナー肝からの細胞移植の検討には細胞収量とviability向上のための工夫が必要と考えられた。
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