| 研究課題/領域番号 |
12671195
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器外科学
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
海野 倫明 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (70282043)
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| 研究分担者 |
阿部 高明 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (80292209)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
2001年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2000年度: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
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| キーワード | LST-1 / 転写因子 / HNF-1 / ルシフェラーゼアッセイ / トランスポーター / NF-E2 / HT17 / AP-1 / 遺伝子上流域 / ケノデオキシコール酸 |
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| 研究概要 |
申請者らは1999年肝細胞に特異的に発現している有機アニオントランスポーター、LST-1遺伝子を世界で初めて単離し発表した(J Blol.Chem.274:17159-63,1999)。このLST-1遺伝子がコードしているLST-1蛋白質は、肝類洞側に存在し、肝細胞への胆汁酸、薬物、ホルモンなどの取込みに関与する極めて重要トランスポーターであることが明らかとなった。本研究では、ヒトLST-1遺伝子の発現調節機構を解明することを目的とする。平成12年度の成果に引き続き、平成13年度には以下が明らかとなった。
1.肝臓由来細胞株HT17細胞を用いたルシフェラーゼアッセイにより、上流域、約-1100bpに存在するAP-1結合配列および、-60bpに存在するHNF1結合領域が転写に重要と考えられた。
2.上流域-60bpのHNF-1結合領域に点突然変異を挿入したレポータープラスミドではルシフェラーゼ活性は著明に低下した。一方、AP-1結合配列に点突然変異を挿入したプラスミドではルシフェラーゼ活性は低下しなかった。
3.上流域-73から-48bpのプライマーをプローブとしてHT17細胞より抽出した核抽出液を用いたelectrophoresis mobility shift assay (EMSA)を施行したところ、配列特異的なシフトバンドが検出された。
4.このシフトしたバンドにHNF-1a抗体を添加することによりさらに移動度が変化したsuper shiftが確認されたことより、この配列にはHNF-1aが結合しているものと考えられた。
以上の結果より、ヒトLST-1の肝臓における転写には、遺伝子上流域約60bpに存在するHNF-1モチーフに結合するHNF-laが重要であると考えられた。
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