| 研究課題/領域番号 |
12671438
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
整形外科学
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
高山 真一郎 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (40138045)
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| 研究分担者 |
仲尾 保志 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (30188883)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2001年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2000年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
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| キーワード | peripheral nerve / neurotropic factor / neurotrophic factor |
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| 研究概要 |
雌のICRマウス(5週令)を使用し、片側の坐骨神経切断モデルを作成した。切断モデルでは、坐骨結節高位で片側の坐骨神経を切断し1、2、4週後にa)切断側b)非切断側の腓腹筋、下腿後面皮膚をそれぞれ採取した。Sham operationモデルは片側の坐骨神経剥離のみを行い、切断モデルと同じく1、2、4週後に剥離側のみ腓腹筋、下腿後面皮膚を採取した。切断側とその反対側(両側)の腓腹筋、下腿後面皮膚をそれぞれ採取(50mg前後)し、液体窒素内で急速冷凍し-80℃で保存した。次に、この組織からtotal RNAを抽出した。この時、あらかじめ濃度がわかっているdeletion RNAを添加し、これを内部標準として用いて、各組織中の神経栄養因子の濃度を測定する。次にtotal RNAをもとに、逆転写反応を行いcDNAを作製する。このcDNAをテンプレートとしてNGFに特異的なプライマーを用い26cycleのPCRを行い、最後にHPLCにより、このPCR産物の濃度を測定した。カラムは非多孔性イオン交換カラムを使用し、溶離液に0から0.58Mの濃度勾配をかけて溶出を行う。DNAの検出は、UV検出器により、260nmでおこなった。得られたクロマトグラムよりあらかじめRNA量が判明している内部標準とpeakを比較することで組織中に含まれる実際のRNA量を測定した。
結果:(1)骨格筋ではNGF, BDNF, NT-3m RNAは、坐骨神経切断後1週、2週、4週と経{時的に増加していた。(2)皮膚では骨格筋に比較し、NGFmRNAは早期に増加のピークに達した。(3)BDNFmRNAは神経切断後、皮膚中では早期(1、2W)には有意な変化は見られなかったが、骨格筋中では経時的に有意に増加した。
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