| 研究課題/領域番号 |
12671475
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
麻酔・蘇生学
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
福田 志朗 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (70322245)
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| 研究分担者 |
松本 美志也 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (60243664)
坂部 武史 山口大学, 医学部, 教授 (40035225)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
3,900千円 (直接経費: 3,900千円)
2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2001年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2000年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
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| キーワード | Ras / アポトーシス / 前脳虚血 / 遅発性神経細胞死 / 免疫ブロッティング / manumycin A / TUNEL染色 / HE染色 / H-Ras / Manumycin A / 神経学的スコア / 海馬 / 非アポトーシス的細胞死 / 免疫ブロッティング法 / Bc1-2 |
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| 研究概要 |
脳虚血後の遅発性神経細胞死におけるアポトーシスの関与が注目されている。In vitroの研究では、細胞情報伝達因子の1つであるRasが、Pl 3-kinaseおよびAktを介してアポトーシスの発現に抑制的に働くと報告されている。今回われわれは、in vivoにおける現象を捉えるため、ラット前脳虚血・再灌流後の海馬にみられるアポトーシスの発生に基づき、遅発性神経細胞死におけるRasの関与を検討した。
《実験1》
【方法】雄ウィスターラットによる15分間の前脳虚血モデルを用い、虚血条件は両側頸動脈遮断に脱血性低血圧を加えた。組織学的検査としてTUNEL染色およびHE染色を行い、また免疫ブロッティング法を用いてRas、Pl 3-kinase、Akt、Bcl-2、α-fodrin分解産物を測定した。【結果】Ras、Pl 3-kinase、Akt、およびBcl-2は対照群と比較し再灌流3日後で有意に減少する一方、α-fodrin分解産物は有意に増加した。虚血再灌流3日後の脳標本では、海馬の神経細胞でHE染色で空胞化や核の濃縮が認められ、TUNEL染色は同部位で陽性を示した。
《実験2》
【方法】同様の10分間虚血モデルを用い、虚血前にmanumycin Aを脳室内投与し、虚血・再灌流3日後に、組織学的検査としてTUNEL染色およびHE染色を行い、また免疫ブロッティング法を用いてα-fodrin分解産物を測定した。対照群として、生理的食塩水ないし2%DMSO脳室内投与後の虚血・再灌流群と比較した。【結果】いずれの検査でもmanumycin A投与群が、対照群よりも海馬の神経細胞傷害が少なかった。
《考察・まとめ》
実験1から前脳虚血によるRasの低下とBcl-2の低下が神経細胞のアポトーシス発生に関わっている可能性が考えられるが、実験2から遅発性神経細胞死は非アポトーシス的細胞死が主である可能性が示唆された。
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