| 研究課題/領域番号 |
12671981
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
外科系歯学
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| 研究機関 | 福岡歯科大学 |
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研究代表者 |
大関 悟 福岡歯科大学, 歯学部, 教授 (80117077)
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| 研究分担者 |
三浦 正資 福岡歯科大学, 歯学部, 助手 (40320337)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2001年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2000年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | tongue cancer / telomerase / carcinogenesis / 4-NQO / oral cancer(口腔癌) / carcinogenesis(発癌) / telomerase(テロメラーゼ) / human telomerase catalytic subunit |
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| 研究概要 |
(1)テロメラーゼ検出法の標準であるTRAP法の定量性を再検討し改良を加えた結果、定量性が大幅に改善され、活性の微小な差が検出可能となった。本研究では、化学誘発舌癌の形成過程におけるテロメラーゼ活性を測定し、in vivo発癌過程において、テロメラーゼがどの時期に活性化されるかについて検討した。テロメラーゼ活性の検出方法は従来のTRAP法を基に、RIを用いないでかつ高感度な方法を開発した。すなわちTRAP法のRIによるプライマーの標識法をビオチン-CDP StarRによる化学発光法へ改変することでRIと同等以上の検出感度を得ることが可能となった。さらにTRAP法のプライマーの改変、各ステップの至適化により、PCR産物の短小化、増幅効率の差、定量性が改善された。
(2)発癌実験:4-Nitroquinoline-N-oxide(4NQO)をラットに低濃度で投与(飲水中に濃度10ppmで混入し経口投与)し、化学誘発舌癌を発生させた。5ヶ月目までを観察期間とした。発癌剤投与後1、2、3週、1、2、3、4、5か月目に経時的にラットを屠殺、舌組織の肉眼的変化および病理組織学的変化の観察を行った。
結果(i)4-NQO投与のラットにおいて、標的臓器の舌に3か月目から表面の白色化、粗造化が認められ、一部の検体ではhyperplasia様の病理組織変化が認められたが、テロメラーゼ活性の上昇は認められなかった。(ii)舌では投与4か月目から腫瘍の形成が認められた。また、腫瘍形成を認めた組織でテロメラーゼ活性の上昇が認められた。(iii)テロメラーゼ活性は、健常舌と上皮過形成の間に統計学的有意さが認められた(p<0.05)。また、健常舌や上皮過形成に比較して、癌組織のテロメラーゼ活性は、有意に高値であった(p<0.01)。(iv)浸潤様式、腫瘍径とテロメラーゼ活性との相関は見られなかった。
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