| 研究課題/領域番号 |
12672105
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
秋光 信佳 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助手 (40294962)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2001年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2000年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | プロリルエンドペプチダーゼ / ノックアウトマウス / ES / 脳機能 / プロテアーゼ |
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| 研究概要 |
マウスプロリルエンドペプチダーゼは、N末側とC末側のペプチダーゼドメイン、並びに中間のプロペラードメインから構成されている。この蛋白質をコードするマウスプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子は、15のエクソンから構成されている。この内、エクソン6は、プロペラードメインを構成するペプチドをコードする。エクソン6の遺伝子欠損マウスの作出を試みた。まず、129系統のマウスのゲノムライブラリーより、プロリルエンドペプチダーゼ遺伝子をクローニングした。得られたゲノムDNAを元に、エクソン6にネオマイシン耐性遺伝子を置換したターゲティングベクターを構築した。エレクトロポーレーション法を用いて、ターゲティングベクターをマウスES細胞に導入し、相同組み換えにより、ES細胞ゲノム上のプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子が破壊されたES細胞を樹立した。さらに、このES細胞を用いて、キメラマウスを作出した。現在、作出したキメラマウスからES由来のF1マウスが誕生するかについて調べている。またプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子の両アリルを破壊したES細胞の樹立が可能であるかに付いて検討した結果、両アリルを破壊したES細胞の樹立が可能であった。得られたES細胞では、プロリルエンドペプチダーゼ酵素活性は全く検出されなかった。また、得られたプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子欠損のES細胞の増殖は、野生型ESと同程度であった。この結果は、本遺伝子がES細胞の増殖には不必要であることを初めて示した結果である。
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