| 研究課題/領域番号 |
12672149
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | (財)東京都老人総合研究所 |
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研究代表者 |
島田 信子 (財)東京都老人総合研究所, 遺伝子情報部門, 助手 (60158962)
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| 研究分担者 |
木村 成道 (財)東京都老人総合研究所, 遺伝子情報部門, 室長 (60073029)
石嶋 康史 科学技術振興事業団, 科学技術特別研究員
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2001年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2000年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
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| キーワード | NDPキナーゼ / アデニル酸シクラーゼ / G蛋白 / PC12D / PACAP / NDPK / 三量体G蛋白 / cAMP / トランスフェクション |
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| 研究概要 |
かつて私共が行ったin vitro実験から強く示唆されていた、ヌクレシドニリン酸キナーゼ(NDPK)の細胞膜情報伝達系(アデニル酸シクラーゼ系(AC))におけるGTP供給作用を、in vivo系(ドミナントネガティブ発現細胞)で証明する目的で実験を行った。不活性型リコンビナントNDPK(rNDPKmα)を導入したPC12D細胞におけるPACAPによるcAMPレベル上昇についてコントロール細胞と比較検討した。ドミナントネガティブ発現細胞では反応性の低下が予想されたが、結果は実験毎にやや不安定で、一定の傾向を示すまでにとどまった。そこで、PC12D細胞の細胞膜を精製し、リコンビナントNDPKによる情報伝達系への直接作用を検討した。膜NDPKはリコンビナントNDPKによって試験管内では直接阻害、あるいは置換されないことを示唆する実験結果を得たので、NDPKは発現後膜に組み込まれる機構があると想定した。しかし、ドミナントネガティブ株(由来)の細胞膜標品のPACAP+GDPによるAC反応性はコントロール細胞膜標品と全く変わらず、この問題を解明するには至らなかった。PC12D細胞膜AC活性のPACAP応答は完全にGTP要求性であり、GDP作用はNDPK阻害剤であるUDPによって低下することから、膜結合性NDPKの存在は疑う余地がない。細胞質NDPKの細胞膜への移行の可能性は残されているものの、細胞膜局在性の未知のアイソフォームの存在の可能性も視野に入れて、今後解明されるべき問題と考えられる。
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