新しい腫瘍関連抗原MK-1の臨床応用に向けての具体的検討

• 研究課題/領域番号: 12672261
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
• 研究分担者: 黒木 求 福岡大学, 医学部, 講師 (10131822) ; 荒川 文子 福岡大学, 医学部, 助手 (50212618)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円); 2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2000年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
• キーワード: 腫瘍関連抗原 / 腫瘍マーカー / EIA / MK-1 / 17-1A / GA733-2 / モノクローナル抗体 / FU-MK-1

研究概要

モノクローナル抗体FU-MK-1が認識する腫瘍関連抗原MK-1は,消化器癌を始めとするほとんどの癌腫に存在する新しい抗原である.われわれは,この抗原が分子量約4万の膜貫通型糖タンパク質であり,既存のいずれの抗原と違うことも証明してきた.本研究は,MK-1の癌の血清診断における意義とこの抗原を分子標的にした癌の免疫療法の意義を検討したものである.
平成12年度は,MK-1の癌の血清診断における意義を検討した.まず,組替えMK-1タンパクをカイコ幼虫に発現させて精製した.精製MK-1でマウスを免疫してモノクローナル抗体を作製し,2種のクローンを選んでサンドイッチEIAを確立した.正常人と癌患者血清中のMK-1を定量した結果,正常人30例ではすべて検出感度(2ng/ml)未満であった。癌患者では236例中24例が陽性(2mg/ml以上)で,最高例は75mg/mlであった.以上のことは,MK-1は他の腫瘍マーカーと違って血中には遊離しにくいが,MK-1陽性でほかのマーカーが陰性の場合,治療後の経過観察に利用できることを示している.
平成13年度は,腫瘍関連抗原MK-1を標的とするT細胞免疫療法を検討した.まず,FU-MK-1抗体の単鎖抗体scFvとスーパー抗原の一つで広くT細胞を活性化するstaphylococcal enterotoxin A(SEA)の変異体を遺伝子レベルで融合して大腸菌にて発現させ融合タンパクを得た.融合タンパクは,in vitroおよびSCIDマウスを利用したin vivoにおいて,T-LAK細胞との組合わせによりMK-1発現癌細胞に対して非常に強い細胞傷害活性を示した.以上の結果は,腫瘍関連抗原MK-1が癌の免疫療法の有用な標的になりうることを示している.

研究成果

• [文献書誌] Tomita, T., Arakawa, F., Yamamoto, T., Kuwahara, M., Watanabe, R., Iwasaki H., Kikuchi, M., Kuroki, Ma: "Molecular identification of a human carcinoma-associated glycoprotein antigen recognized by mouse monoclonal antibody FU-MK-1"Jpn.J.Cancer Res.. 91. 231-238 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tomita, Y., Arakawa, F., Liao, S., Khare, P.D., Kuroki, Mo., Yamamoto, T., Ariyoshi, A., Kuroki, Ma.: "Carcinoma-associated antigens MK-1 and CEA in urological cancers"Anticancer Res.. 20. 793-797 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Sato, N., Saga, T., Sakahara, H., Nakamoto, Y., Zhao, S.J., Kuroki, Ma., Iida, Y., Endo, K., Konishi, J.: "Avidin chase can reduce myelotoxicity associated with radioimmunotherapy of experimental liver micrometastases in mice"Jpn.J.Cancer Res.. 91. 622-628 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Arakawa, F., Khare, P.D., Kuroki, Mo., Liao, S., Matsumoto, H., Abe, H., Imakiire, T.: "Specific targeting strategies of cancer gene therapy using a single-chain variable fragment (scFv) with a high affinity for CEA"Anticancer Res.. 20. 4067-4071 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Khare, P.D., Liao, S., Kuroki, Mo., Hirose, Y., Arakawa, F., Nakamura, K., Tomita, Y., Kuroki, Ma.: "Specifically targeted killing CEA-expressing cells by a retroviral vector displaying scFv antibody to CEA and carrying the gene for iNOS"Cancer Res.. 61. 370-375 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Saga, T., Sakahara, H., Nakamoto, Y., Sato, N., Ishimori, T., Sasai, K., Kuroki, Ma., Konishi, J.: "Enhancement of the therapeutic outcome of radio-immunotherapy by combination with whole-body mild hyperthermia"Eur.J.Cancer. 37. 1429-1434 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Khare, P.D., Liao, S., Kuroki, M., Arakawa, F., Kuroki, Ma.: "2nd Congress of the Federati on of Immunological Societies of Asia-Oceania (FIMSA)"Sirisinha, S.C.Chaiyaroj and P.Tapchaisri, eds.), Monduzzi Editore, Bologna (Italy). 160 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tomita,T., Arakawa,F., Yamamoto,T., Kuwahara,M., Watanabe,R., Iwasaki,H., Kikuchi,M., Kuroki,Ma.: "Molecular identification of a human carcinoma-associated glycoproteih antigen recognized by mouse monoclonal antibody FU-MK-1"Jpn. J. Cancer Res.. 91(2). 231-238 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Watanabe,N., Oriuchi,N., Inoue,T., Kuroki,Ma., Matsuoka,Y., Tanaka,S., Murata,H., Kim,E.E., Sasaki,Y.: "CaNa_2EDTA for improvement of radioimmunodetection and radioimmunotherapy with <111>^ln and <90>^Yttrium-DTPA-anti-CEA MAbs in nude micebearing human colorectal cancer"J. Nucl. Med.. 41(2). 337-344 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tomita,Y., Arakawa,F., Liao,S., Khare,P.D., Kuroki,Mo., Yamamoto,T., Ariyoshi,A., Kuroki,Ma.: "Carcinoma-associated antigens MK-1 and CEA in urological cancers"Anticancer Res.. 20(2). 793-797 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Sato,N., Saga,T., Sakahara,H., Nakamoto,Y., Zhao,S.J., Kuroki,Ma., Iida,Y., Endo,K., Konishi,J.: "Avidin chase can reduce myelotoxicity associated with radioimmunotherapy of experimental liver micrometastases in mice"Jpn. J. Cancer Res.. 91(6). 622-628 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kuroki,Mo., Arakawa,F., Khare,P.D., Kuroki,Mo., Liao,S., Matsumoto,H., Abe,H., Imakiire,T.: "Specific targeting strategies of cancer gene therapy using a single-chain variable fragment (scFv) with a high affinity for CEA"Anticancer Res.. 20(6). 4067-4071 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Oikawa,S., Sugiyama,M., Kuroki,Mo., Kuroki,Ma., Nakazato,H.: "Extracellular N-domain alone is sufficient for specific heterophlic adhesion between members of carcinoembryonic antigen family, CD66b and CD66c"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 278(3). 564-568 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Khare,P.D., Liao,S., Kuroki,Mo., Hirose,Y., Arakawa F., Nakamura,K., Tomita,Y., Kuroki,Ma.: "Specifically targeted killing carcinoembryonic antigen (CEA)-expressing cells by a retrbviral vector displaying single chain variable fragmented (scFv) antibody to CEA and carrying the gene for inducible nitric oxide synthase (iNOS)"Cancer Res.. 61(1). 370-375 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Liao,S., Khare,P.D., Kuroki,Mo., Arakawa,F., Tomita,Y., Kuroki,Ma.: "Targeting of lymphokine-activated killer activity to CEA-expressing tumor cells with a recombinant fusion protein of IL-2 and anti-CEA scFv antibody"Antiancer Res.. 21(3). 1673-1680 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Saga T., Sakahara H., Nakamoto Y., Sato N., Ishimori T., Mamede M., Kobayashi H., Masunaga S., Sasai K., Kuroki Ma., Konishi J.: "Enhancement of the therapeutic outcome of radio-immunotherapy by combination with whole-body mild hyperthermia"Eur. J. Cancer. 37(11). 1429-1434 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kondo,Y., Hinoda,Y., Akashi,H., Sakamoto,H., Itoh,F., Hirata,K., Kuroki,Ma., Imai,K.: "Measurement of circulating biliary glycoprotein (CD66a) in liver diseases"J. Gastroenterol.. 36(7). 470-475 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Jirsa,M., Muchova,L., Draberova,L., Draber,P., Smid,F., Kuroki,Ma., Marecek Z., Groen,A.K.: "Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 is the 85-kDa pronase-resistant biliary glycoprotein in the cholesterol crystallization promoting low density protein-lipid complex"Hepatology. 34(6). 1075-1082 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Khare,P.D., Liao,S., Kuroki,M., Arakawa,F., Kuroki,Ma.: "Specific gene therapy of CEA-expressing tumor cells using reconstructed retrovirus"In : 2nd Congress of the Federation of Immunolo-gical Societies of Asia-Oceania (S. Sirisinha, S. C. Chaiyaroj and P. Tapchaisri, eds.), Monduzzi Editore, Bologna (Italy). 51-55 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Sato, N., Saga, T., Sakahara, H., Nakamoto, Y., Kuroki, Ma., et al.: "Avidin chase can reduce myelotoxicity associated with radioimmunotherapy of experimental liver micrometastases in mice"Jpn. J. Cancer Res.. 91(6). 4067-4071 (2000)
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Arakawa, F., Khare, P.D., Kuroki, Mo., Liao, S., et al.: "Specific targeting strategies of cancer gene therapy using a single-chain variable fragment (scFv) with a high affinity for CEA"Anticancer Res.. 20(6). 1075-1082 (2000)
• [文献書誌] Saga, T., Sakahara, H., Nakamoto, Y., Sato, N., Kuroki, Ma., et al.: "Enhancement of the therapeutic outcome of radio-immunotherapy by combination with whole-body mild hyperthermia"Eur. J. Cancer. 37(11). 1429-1434 (2001)
• [文献書誌] Jirsa, M., Muchov, L., Drberov, L., Drber, P., Smd, F., Kuroki, Ma., et al.: "CEACAM1 is the 85-kDa pronase-resistant biliary glycoprotein in the cholesterol crystallization promoting low density protein-lipid complex"Hepatology. 34(6). 1075-1082 (2001)
• [文献書誌] Khare, P.D., Kuroki, Ma., Liao, S., Hirose, Y., Fujimura, S., et al.: "Tumor Growth Suppression by a Retroviral Vector Displaying scFv Antibody to CEA and Carrying the iNOS Gene"Anticancer Res.. 22(2)(In press). (2002)
• [文献書誌] Ueno, A., Arakawa, F., Abe, H., matsumoto, H., Kuroki, Ma.: "T-cell Immunotherapy for human MK-1-expressing tumors using a fusion protein of the superantigen SEA and anti-MK-1 scFv antibody"Anticancer Res.. 22(In press). (2002)
• [文献書誌] 阿部裕典, 黒木 求, 今給黎尚幸, 荒川文子, 黒木政秀: "日本文子腫瘍マーカー研究会誌"日本文子腫瘍マーカー研究会(石井 勝・編). 82 (2001)
• [文献書誌] Tomita,Y.,Arakawa,F.,Liao,S.,Khare,P.D.,Kuroki,Mo.,Yamamoto,T.,Ariyoshi,A.,Kuroki,Ma.:: "Carcinoma-associated antigens MK-1 and CEA in urological cancers."Anticancer Res.. 20・2A. 793-797 (2000)
• [文献書誌] Tomita,T.,Arakawa,F.,Yamamoto,T.,Kuwahara,M.,Watanabe,R.,Iwasaki H.,Kikuchi,M.,Kuroki,Ma.:: "Molecular identification of a human carcinoma-associated glycoprotein antigen recognized by mouse monoclonal antibody FU-MK-1."Jpn.J.Cancer Res.. 91・2. 231-238 (2000)
• [文献書誌] Miyajima-Uchida,H.,Hayashi,H.,Beppu,R.,Kuroki,Mo.,Fukami,M.,Arakawa,F.,Tomita,Y.,Kuroki,Ma.: "Production and accumulation of thrombospondin-1 in human retinal pigment epithelial cells."Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.. 41・2. 561-567 (2000)
• [文献書誌] Egawa,K.,Honda,Y.,Kuroki,Ma.,Ono,T.: "The carcinoembryonic antigen (CEA) family (CD66) expressed in melanocytic naevi is not expressed in blue naevuscell naevi in dendritic type."J.Cutan.Pathol.. 27・7. 351-358 (2000)
• [文献書誌] Oikawa,S.,Sugiyama,M.,Kuroki,M.,Kuroki,Ma.,Nakazato,H.: "Extracellular N-domain alone is sufficient for specific heterophlic adhesion between members of carcinoembryonic antigen family, CD66b and CD66c."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 278・3. 564-568 (2000)
• [文献書誌] Khare,P.D.,Liao,S.,Kuroki,Mo.,Hirose,Y.,Arakawa,F.,Nakamura,K.,Tomita,Y.,Kuroki,Ma.: "Specifically targeted killing carcinoembryonic antigen (CEA)-expressing cells by a retroviral vector displaying single chain variable fragmented (scFv) antibody to CEA and carrying the gene for inducible nitric oxide synthase (iNOS)."Cancer Res.. 61・1. 370-375 (2001)
• [文献書誌] Khare,P.D.,Liao,S.,Kuroki,M.,Arakawa,F.,Kuroki,Ma.: "2nd Congress of the Federation of Immunological Societies of Asia-Oceania (FIMSA) (S.Sirisinha,S.C.Chaiyaroj and P.Tapchaisri, eds.)"Monduzzi Editore, Bologna (Italy). 160 (2000)