| 研究課題/領域番号 |
12680604
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
構造生物化学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
高崎 誠一 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (80112093)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2001年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2000年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 受精 / 糖鎖結合タンパク質 / 精子 / N-アセチルラクトサミン / 糖鎖認識分子 / 接着 / 糖鎖プローブ |
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| 研究概要 |
これまで、ブタの受精には複数の糖鎖認識機構が働いていることを明らかにしており、この知見に基づいて精子側の糖鎖結合タンパク質分子の解析を行い、以下の結果を得た。
1.糖鎖ポリマーをプローブとして、精子頭部にN-アセチルラクトサミン構造を認識する分子、およびLewis X構造を認識する分子が別々の分子として精子の細胞膜に存在することが明かとなった。
2.いずれの糖鎖認識分子も、精子が受精能を獲得した後で、より強く検出することができ、また、先体反応の誘導後には、殆ど検出されなくなることが観察された。
3.単離したブタ精子細胞膜のTriton可溶化物の遠心上清中に、N-アセチルラクトサミン構造やLewis X構造を有するプローブを固相化したウェルに対して特異的に結合する複数のバンドを検出することができた。これらの結合は対応するオリゴ糖によって特異的に阻害された。
4.精子細胞膜画分を中性の界面活性剤で可溶化し、N-アセチルラクトサミン構造を有する糖タンパク質を結合させたビーズによる親和性カラムクロマトグラフィーを行い、約70kDaの分子量を持つタンパク質を検出した。この分子のN末端やプロテアーゼ消化ペプチドの部分アミノ酸配列を決定し、この配列情報をもとに遺伝子のクローニングを行い、部分塩基配列を決定した。
これらの知見は、今後の受精機構の分子レベルでの解析の基礎となるものである。
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