| 研究課題/領域番号 |
12680678
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
分子生物学
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| 研究機関 | 東邦大学 |
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研究代表者 |
三宅 早苗 東邦大学, 医学部, 講師 (00256687)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2001年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2000年度: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
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| キーワード | DNA複製 / MCM / 複製前複合体 / sna41 / CDC45 / DNA複製前複合体 / 分裂酵母 / cdc45 |
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| 研究概要 |
S.pombe MCMの変異体であるnda1変異株及びnda4変異株のサプレッサーの単離を行なった結果、nda4変異株のサプレッサーが12株単離できた。これらのサプレッサーは全て同じ遺伝子座に変異を生じており、この遺伝子をsna41遺伝子と名付けた。Sna41は生育に必須なDNA複製に関与し、S.cerevisiaeのCDC45と全体にわたって相同性があった。
Sna41の機能解析のため、まずSna41に対する抗体作成を試みたが、抗体は作成できなかった。そこで、タグをつけたSna41を発現する株を作成し、この株を用いて細胞内局在を蛍光抗体法により調べた。Sna41はG1期において、核に存在するもの、細胞質に存在するものなど様々な局在を示した。細胞抽出液を分画し、ウエスタンブロット法で調べた結果においても各々の分画にsna41蛋白質が検出され、この蛋白質は細胞全体に局在する可能性が示された。
また、sna41遺伝子の遺伝子変異の場所を、それぞれの変異株のsna41遺伝子の塩基配列を決定することにより同定した。1株では3箇所のアミノ酸に置換が起こっていたが、その他の11株では1箇所のみのアミノ酸の置換が起こっていた。単一アミノ酸の置換によって変異を生じているのは、229、231、255、410、508、553番目のアミノ酸に変異が起こった株であった。これらの変異蛋白質を認識するため、C末にタグをつけたSna41-3HA蛋白質を発現する株を作成を試みたが、単離することはできなかった。このことより、変異蛋白質は非常に不安定な蛋白質と考えられた。
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