| 研究課題/領域番号 |
12680714
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
発生生物学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
真壁 和裕 京都大学, 大学院・理学研究科, 助手 (60222288)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2001年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2000年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | ホヤ / 母性因子 / RNA / 局在 / 後極 / UTR / EST / 母性RNA / 局在RNA / 細胞内局在 |
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| 研究概要 |
我々はモザイク卵として知られるホヤ胚において、卵内で局在するRNAを多数単離してきた。なかでも胚の前後軸形成・不等分裂などに必須とされている植物極側後方の領域に局在するRNAをいくつも単離し、これらをポストプラズミックRNAと名づけた。本研究ではこれらのRNAの局在を担う配列の絞り込みと、その領域に結合する因子の単離を通して、ホヤの卵や胚におけるRNAの局在に関わる分子機構を明らかにすることを目的とする。上記のうち6つのRNAの詳細な分布パターンの解析をしたところ、その局在経路の違いからそれらがtypeIとIIのふたつのグループに分類されることを明らかにした。標識した合成RNAの未受精卵への顕微注入実験から、局在には両typeともに3'UTRの一部が必要十分であることが示唆された。そこには特に保存されている配列は見出されなかったため、各RNAの3'UTRを含む標識RNAの顕微注入によって50塩基程度まで配列を絞り込んだ。さらにその領域に結合するトランスの因子を単離精製することによって、ホヤの卵や胚におけるRNAの局在に関わる分子機構を明らかにするべく、判明したシス配列を用いたゲルシフト分析・East-Western分析・UVクロスリンク分析などを駆使して、卵内のタンパク質の中から配列特異的に結合するトランス因子を検出ずる系を確立し、そのタンパク質の性状を明らかにするとともに、そのタンパク質の生化学的単離精製やそのcDNAの単離を行っている。一方、電子顕微鏡を用いて、局在RNAは超微細構造上でタイプ毎に異なる分布をしていることが観察された。これらのことから、ホヤの卵内および初期胚内でRNAが局在する機構について総合的な知見が得られると思われる。
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