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視細胞外節に対するエネルギー供給機構のin situ及び免疫細胞化学的解明

研究課題

研究課題/領域番号 12770004
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 解剖学一般(含組織学・発生学)
研究機関名古屋大学

研究代表者

西沢 祐治  名古屋大学, 大学院・医学研究科, 助手 (80252229)

研究期間 (年度) 2000 – 2001
研究課題ステータス 完了 (2001年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2000年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
キーワードクレアチンキナーゼ / 視細胞 / ミトコンドリア / 免疫細胞化学 / ATP / クレアチンリン酸シャトル機構 / クレアチンリン酸
研究概要

視細胞のクレアチンリン酸シャトル機構を明らかにするために,ミトコンドリア型クレアチンキナーゼ(Mi-CK)に対する抗体を作製し,免疫細胞化学によって視細胞におけるクレアチンキナーゼの分布を検討した.
ミトコンドリア型クレアチンキナーゼ(Mi-CK)に対する抗体を作製するために,視細胞の全タンパク質を2次元電気泳動によって分離し,Mi-CKのタンパク質スポットを質量分析装置によって同定した.このスポットに含まれるタンパク質をPVDF膜に転写後,N末端配列をプロテインシークエンスして, cDNAから予測される配列と比較したところ,Mi-CKのミトコンドリアヘの移行シグナル(シグナルシークェンス)の存在が明らかになった.成熟タンパク質のN末端配列は脳型クレアチンキナーゼ(B-CK)や筋型クレアチンキナーゼ(M-CK)と全く異なっていたので,この部分の14アミノ酸配列(ASERRRLYPPSAEY)を抗原としてウサギ2羽に免疫した.現在免疫作業続行中であるが,抗体価測定のために中途採血した血液から作製した血清を用いて免疫細胞化学を行ったところ,作製したMi-CKに対する抗血清は視細胞のミトコンドリアをラベルし,バックグランドは比較的低かった.これによりプレリミテリーな結果であるが,視細胞のMi-CKはミトコンドリアのみに存在することがほぼ明らかになった.このことは視細胞のミトコンドリアと内接との間のクレアチンリン酸シャトル機構の成立を示唆し,さらに前年度に明らかにした外節・内接間のクレアチンリン酸シャトル機構の存在を支持するものである.

報告書

(2件)
  • 2001 実績報告書
  • 2000 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Nishizawa, Y., Usukura, J., Singh, DP., Chylack, LT., SHINOHARA, T.: "Spatial and Temporal dynamics of twq alternatively spliced regulatory factors, lens epithelium-derived growth factor (ledgf/p75) and p52, in the nucleus"Cell Tissue and Research. 305. 107-114 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Usukura,J.,Nishizawa,Y.,Shimomura,A.,Kobayashi,K.,Nagatsu,T.& Hagiwara,M.: "Direct imaging of phosphorylation-dependent conformational change and DNA binding of CREB by electron microscopy"Genes to Cells. 5. 515-522 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Wakabayashi,T.,Teranishi,M.,Karbowski,M.,Nishizawa,Y.,Usukura,J.,Kurono,C & Soji,T.: "Functional aspects of megamitochondria isolated from hydrazine-and ethanol-treated rat livers"Pathology International. 50. 20-23 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 2000-04-01   更新日: 2016-04-21  

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