| 研究概要 |
筆者らは以前に、ヒトTSH受容体細胞外領域に相応した一連の合成ペプチドを用いて白人のバセドウ病患者におけるTSH受容体上のTリンパ球エピトープがアミノ酸158-176,207-222,343-362/357-376であることを報告した。また筆者は、白人においてバセドウ病の危険因子であると考えられているHLA-DR3分子を精製し、HLA-DR3分子とヒトTSH受容体合成ペプチドの結合を調べ、HLA-DR3分子がTリンパ球のレパートリー形成に与える影響を介してバセドウ病への罹患危険性を高めている可能性を報告した。
今回の研究は、抗原提示細胞がHLA-DR3分子上に実際に提示している(naturally processed)ヒトTSH受容体ペプチドを同定する目的で行なっている。
1)ヒトTSH受容体細胞外領域をコードするcDNAを哺乳類細胞発現ベクターであるpTARGET^<TM> expression vector(Promega)に組み込んだ。
2)QBL細胞(EBウイルスにより形質変換したBリンパ球ライン,HLA-DR3をホモに発現する)にElectroporation法(EQUBIO Easyject Optima ET-003を使用)にてpTARGET^<TM> vector/ヒトTSH受容体cDNAを導入した。
3)抗DR抗体L243(ATCC)を用いたアフィニティカラムにて、ヒトTSH受容体cDNAを導入したQBL細胞からDR3-抗原ペプチド複合体を精製した。
4)DR3-抗原ペプチド複合体をpH2.0にてインキュベートして抗原ペプチドをDR3から解離させ、フィルターにてDR3から分離した。
以下は現在進行中。
5)分離した抗原ペプチドのアミノ酸配列決定
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