| 研究課題/領域番号 |
12771155
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
保存治療系歯学
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| 研究機関 | 神奈川歯科大学 |
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研究代表者 |
角田 晃 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (70236933)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2000年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | 骨シアロタンパク質 / バキュロウィルス / 細胞接着活性 |
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| 研究概要 |
ヒト組み換え骨シアロタンパク質の生化学的特性の解析
昨年度の研究で、我々はバキュロウイルス発現システムを用いて、組み換えヒト骨シアロタンパク質(rhBSP)をSf9細胞内で65kDaおよび60kDaの分子量サイズで発現することに成功した。またcobalt affinity chromatographyを用いて、その精製に成功した。そこで今年度は、rhBSPの生理活性を調べる目的で、ウシ歯小嚢由来前駆体細胞(Bovine Dental Follicle Cells ; BDFC)に対する細胞接着活性を測定した。
実験方法はrhBSPをコートした96-multi well plateに、[S^<35>]methionineでラベルした2×10^4個のBDFCを播種し、37℃で1時間インキュベートを行った。接着した細胞数は、細胞を0.1%SDSで可溶化したのちに液体シンチレーションカウンターを用いて測定した。その結果、rhBSPは、BDFCに対して有意に細胞接着活性を有することが認められた。以上の結果より、本システムは生理活性を有するrhBSPを発現させるのに有用である可能性が示唆された。
しかしながら、本システムでは、創薬を主眼とした場合にタンパクの発現量に問題を残しており、現在より高い収量を得ることを目的として、in vitro translation systemおよびタンパク高発現型昆虫細胞および改良型ベクターを用いた実験を立案中である。
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