研究課題/領域番号 |
12877026
|
研究種目 |
萌芽的研究
|
配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
病態医化学
|
研究機関 | 川崎医科大学 |
研究代表者 |
高田 穣 川崎医科大学, 医学部, 教授 (30281728)
|
研究期間 (年度) |
2000
|
研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
|
配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2000年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
|
キーワード | BRCA2 / 相同DNA組み換え / 家族性乳ガン |
研究概要 |
様々な状況証拠から、BRCA2の変異によってHRの異常が起こっていることが推定されている。本研究ではまず、ニワトリBRCA2の全長cDNAのクローニングを行った。ヒトBRCA2の部分配列をプローブとしてストリンジェンシーを下げたハイブリでニワトリライブラリーをスクリーニングし、N末、C末のcDNAクローンを得た。さらにその中間に6kb程度の不明部分があったので、そこはN末、C末の既知配列からプライマーをデザインしてPCRし、ニワトリcDNAの中間部分を得た。現在ドラフトシーケンスは終了し、さらに確認のシーケンスを行っている。ヒトのBRCA2とはかなりダイバージした部分、良く保存された部分も見られ、機能上重要な部分が浮かび上がってきそうである。さらに、ゲノムクローンを分離し、ターゲティングベクターを作成し、DT40にトランスフエクトしてクロンをサザンで選別し、ヘテロのクローンを得た。このヘテロヒトBRCA2を発現させてウェスタンを行って確認しようとしている。BRCA2が巨大なタンパクであるためか、ウェスタンブロットがなかなか成功しない。現在Inducible Cre recombinaseの使用も検討中である。
|