生理活性物質産生腸内フローラによる疾病の予防と治療

• 研究課題/領域番号: 12877047
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 細菌学(含真菌学)
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 大西 克成 徳島大学, 医学部, 教授 (10037400)
• 研究分担者: 中山 治之 徳島大学, 医学部, 助手 (80294669) ; 片岡 佳子 徳島大学, 医学部, 助手 (40189303) ; 桑原 知巳 徳島大学, 医学部, 助教授 (60263810) ; 有持 秀喜 徳島大学, 医学部, 教務員 (30311822)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円); 2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2000年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: 機能性腸内菌 / ラクトフェリン産生腸内菌 / ラクトフェリン / Bacteroides uniformis / 発癌抑制 / 細胞障害活性 / YAC-1細胞 / プロバイオティクス / リコペン産生大腸菌 / aberrant crypt foci (ACF) / azoxymethane

研究概要

昨年度は発癌抑制作用を有するlycopeneおよびlactoferrinをそれぞれ産生する大腸菌およびBacteroides uniformisを作製し腸管に定着させることで、azoxymethane(AOM)で誘発される大腸前癌病変aberrant crypt foci(ACF)の形成が抑制されることを示した。本年度はラクトフェリン産生腸内菌であるBacteroides uniformis TCTK101株を用いて以下の点を明らかにした。
1.ヒト由来ラクトフェリン遺伝子を大腸菌-BacteroidesのシャトルベクターpVAL-1に導入して得られたプラスミドpVLFKを用いてBacteroides uniformis BU1001株を形質転換することでラクトフェリン産生B. uniformis TCTK101株を作製した。900bpのラクトフェリンDNAプローブを用いたノーザンハイブリダイザーションによって2.2kbのラクトフェリンmRNAが合成されていることを確認した。
2.B. uniformis TCTK101株においてラクトフェリンタンパク質は外膜に局在していた。
3.B. uniformis TCTK101株の一夜培養液をF344ラットに飲料水として摂取させたところ、ベクター対照株であるB. uniformis TCTK11株投与群と比べて脾臓単核細胞のYAC-1細胞に対する細胞障害活性が有意に上昇した。

研究成果

• [文献書誌] Narioka, J. et al.: "Major liver resection in obstructive jaundice promotes bacterial translocation in rats colonized predominantly with indigenous Escherichia coli"J. Med. Microbiol. (in press). (2002)
• [文献書誌] Kuwahara, T. et al.: "Physical and genetic map of the Bacteroides fragilis YCH46 chromosome"FEMS Microbiol. Lett.. (in press). (2002)
• [文献書誌] Intiyot, Y. et al.: "Antimutagenicity of Murdannia loriformis in the Salmonella mutation assay and its inhibitory effects on azoxymethane induced DNA methylation and aberrant crypt focus formation in male F344 rats"J. Med. Invest.. (in press). (2002)
• [文献書誌] Chewonarin, T. et al.: "Expression of human lactoferrin in Bacteroides uniformis and its effect on azoxymethane induced aberrant crypt focus formation in the rat colon"Anaerobe. 7(5). 247-253 (2001)
• [文献書誌] 大西克成他: "生理活性物質産生腸内菌による大腸癌の予防"腸内細菌学雑誌. 14. 25S-27S (2000)
• [文献書誌] Chiampanichayakul,S. et al.: "Inhibitory effects of bitter melon (Momordica charantia Linn.) on bacterial mutagenesis and aberrant crypt focus formation in the rat colon."J.Med.Invest.. 48(1/2)(in press). (2001)
• [文献書誌] Higashimoto,M. et al.: "Inhibitory effects of herbal teas and herb extracts on the mutagenicity of 1-metyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid upon treatment with nitrite in the presence of ethanol."Environ.Mutagen.Res.. 23(in press). (2001)
• [文献書誌] Kuwahara,T. et al.: "Genetic variation in 16S-23S rRNA internal transcribed spacer regions and the possible use of this genetic variation for molecular diagnosis of Bacteroides species."Microbiol.Immunol.. 45(in press). (2001)
• [文献書誌] Kuwahara,T. et al.: "PCR-dot blot hybridization based on the neuraminidase-encoding gene is useful for detection of Bacteroides fragilis."J.Med.Invest.. 48(1/2)(in press). (2001)
• [文献書誌] Chone,Y. et al.: "Low susceptibility of Long-Evans Cinnamon rats to N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine-induced urinary bladder carcinogenesis and inhibitory effect of urinary copper."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 16-24 (2001)
• [文献書誌] Higashimoto,M. et al.: "Inhibitory effects of tea extracts on the mutagenicity of 1-metyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid on treatment with nitrite in the presence of ethanol."Food Chem.Toxicol.. 38. 7-13 (2000)