MLL遺伝子の融合遺伝子のRDA法とマイクロアレイを用いた標的遺伝子の単離と解析

• 研究課題/領域番号: 12877123
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 林 泰秀 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (30238133)
• 研究分担者: 小林 美由紀 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (60205391) ; 滝 智彦 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50322053) ; 井田 孔明 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60313128) ; 川口 裕之 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (00313130)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円); 2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2000年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: 急性白血病 / 11q23転座 / MLL遺伝子 / gene chip / HOXA9遺伝子 / HOXD13遺伝子 / SEPTIN6遺伝子 / CDCRE1遺伝子 / 急性リンパ性白血病 / CBP遺伝子 / p300遺伝子 / 乳児白血病 / AF4遺伝子

研究概要

予後不良な11q23転座型急性リンパ性白血病(ALL)の11q23領域から単離されたMLL遺伝子を用いて、これまでにAF-5α遺伝子、CBP, p300,ABI-1,AF17q25,AF5q31,AF10q22遺伝子を単離した。今年度はさらに乳児急性骨髄性白血病のt(X;11)(q22;q23)のXq22領域よりcDNA panhandle polymerare chain reaction法を用いて新規遺伝子のSEPTIN6をクローニングした。この遺伝子はこれまでのMLLの相手遺伝子CDCREL1,AF 17q25と相同性がみられ、SEPTIN familyと思われた。現在マウスのSeptin6遺伝子を単離して、ES細胞に導入し、ノックアウトマウスを作成しつつある。これらの遺伝子のfull sequence を明らかにし、その性状を検討する。また同じ転座を持つ白血病細胞よりRNAを抽出してcDNAライプラリーを作成し、それぞれのキメラcDNAを作成し、ベクターに挿入してマウスの32Dc13細胞へ強制発現させ、発現の前後の細胞からRNAを抽出してcDNAを作成し、発現する遺伝子の違いをGene Chipを用いて発現プロファイルの検討を行い、標的遺伝子を検索している。今年度はt(4;11)-とt(11;19)-ALLの新鮮白血病検体各8例からRNAを描出し、Affymetrix社のGene Chipで発現プロファイルを検討した。これらの新鮮白血病検体のほとんどがこれまでにALLに特異的と報告された遺伝子の発現がみられ、t(4;11)の1例のみは急性骨髄性白血病に特異的とされる遺伝子の発現もみられたが、mixed lineageの性状を有することが示唆された。またt(4;11)とt(11;19)で異なった発現プロファイリングを示す遺伝子もみられ、HOXA9,HOXA10,HOXD13,FLT3,CD19等の遺伝子につき現在その詳細を検討している。

研究成果

• [文献書誌] Tatsumi K.: "The CDCRL1 gene fused to MLL in de novo acute myeloid leukemia with t(11;22)(q23;q11.2) and its frequent expression in myeloid leukemia cell lines"Genes Chromosomes Cancer. 30. 230-235 (2001)
• [文献書誌] Niitsu N.: "Sensitization by 5-aza-2'-deoxyeytidine of leukaemia cells with MLLabnorma!ities to induction of differentiation by all-trans retinoic acid and 1alpha, 25-dihydroxyvitamin D3"Br J Haematol. 112. 315-326 (2001)
• [文献書誌] Niitsu N.: "Downregulation of MLL-CBP fusion gene expression is associated with differentiation of SN-1 cells with t(11;16)(q23;p13)"Oncogene. 20. 375-384 (2001)
• [文献書誌] Ohnishi H.: "An infant with t(4;11)(q21;q23) acute lymphoblastic leukemia successfully treated using immunomagnetically purged autologous bone marrow transplantation"Med Pediatr Oncol. 36. 388-389 (2001)
• [文献書誌] Shibuya N.: "t(10;11)-Acute Leukemias with MLL-AF10 and Transcripts ; Specific Expression Patterns Leukemia and Solid Tumor Cell Lines"Genes Chromosomes Cancer. 32. 1-10 (2001)
• [文献書誌] Ono R.: "SEPTIN6, a Human Homologue to Mouse Septin6, Os Fused to MLL in Infant Acute Myeloid Leukemia with Complex Chromosomal Abnormalities Involving 11q23 and Xq24"Cancer Res.. 62. 333-337 (2002)
• [文献書誌] Sugita K. et al.: "MLL-CBP fusion transcript in a therapy-related acute myeloid leukemia with the t(11;16)(q23;p13) which developed in an acute lymphoblastic leukemia patient with Fanconi anemia."Genes Chromosome Cancer. 27. 264-269 (2000)
• [文献書誌] Hayashi Y. et al.: "SN-1, a novel leukemic cell line with t(11;16)(q23;p13) : myeloid characteristics and resistance to Retinoids and Vitamin D3."Cancer Res. 60. 1139-1145 (2000)
• [文献書誌] Xu F. et al.: "Tandem duplication of the FLT3 gene is infrequent in infant acute leukemia."Leukemia. 14. 945-947 (2000)
• [文献書誌] Kojima S. et al.: "An effective chemotherapeutic regimen for acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome in children Down's syndrome."Leukemia. 14. 786-791 (2000)
• [文献書誌] Tatsumi K. et al.: "The CDCREL1 gene fused to MLL in de novo acute myeloid leukemia with t(11;22)(q23;q11.2) and its frequent expression in myeloid leukemia cell lines."Genes Chromosomes Cancer. 30. 230-235 (2000)
• [文献書誌] Shibuya N. et al.: "t(10;11)-Acute Leukemias with MLL-AF10 and MLL-ABI1 Chimeric Trnascripts; Specific Expression Patterns of ABI1 Gene in Leukemia and Solid Tumor Cell Lines."Genes Chromosomes Cancer. (in press). (2000)