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軟骨特異的な選択的スプライシング因子に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 12877227
研究種目

萌芽的研究

配分区分補助金
研究分野 整形外科学
研究機関大分医科大学

研究代表者

吉岡 秀克  大分医科大学, 医学部, 教授 (00222430)

研究分担者 松尾 哲孝  大分医科大学, 医学部, 助手 (10284788)
モハメド カレドザマン  大分医科大学, 医学部, 助手 (70305035)
研究期間 (年度) 2000 – 2001
研究課題ステータス 完了 (2001年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2001年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2000年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワードマイナーコラーゲン / 選択的スプライシング / 軟骨 / 細胞外マトリックス / ホモロガスリコンビネーション
研究概要

1.ミニジーンによる転写産物の解析
マウスα1(XI)鎖遺伝子のエクソン5、6A、6B、7、8、9を含むミニジーンを用いて、この領域の選択的スプライシングの実験を行った。使用した細胞はRCS(軟骨肉腫細胞)、A204(横紋筋肉腫細胞)及び293細胞(胎児腎細胞)の三種類である。前二者はα1(XI)鎖発現細胞であり、後者は非発現細胞である。RCSにおいては6B-7-8、6A-7-8、7-8、6B-7、7のパターンが見られた。一方、A204では6A-7-8が見られ、293細胞も同様に6A-7-8のパターンが見られた。これは6A-7-8がこの遺伝子のスプライシングにおける基本型であり、軟骨には特別な組織特異的な因子が必要であることを示唆するものであった。さらにDNA断片を欠失させて作製したコンストラクトを用いた実験を行った。その結果、エクソン7が、軟骨型パターンを生じるのに重要であることがわかった。また、エクソン6Bにおいて、軟骨の特異的発現に重要と思われるプリン・リッチ及びAC・リッチ・エクソンスプライシング・エンハンサー領域が同定できた。今後、この因子の同定を行っていく予定である。
2.ホモロガスリコンビネーション法を用いた特定エクソン欠損マウスの作製
エクソン6-8の欠損マウスを作製する為にまずES細胞を用いてキメラマウスを作製し、さらにヘテロマウス及びホモの欠損マウスを作製した。このマウスを用いて生化学的、形態学的、発生学的に解析を行っている。又、エクソン6A及び6B領域の機能を解析する為に、エクソン6B及び6A欠損のターゲティングベクターを作製した。今後、これを用いて欠損マウスを作製する予定である。

報告書

(2件)
  • 2001 実績報告書
  • 2000 実績報告書
  • 研究成果

    (11件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (11件)

  • [文献書誌] Fujiwara S et al.: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.Boil.Chem.. 276・16. 13340-13347 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Iyama K et al.: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. 20・1. 53-61 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Sumiyoshi H et al.: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynamics. 220・2. 155-162 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Chen Y et al.: "Cis-acting elements regulate alternative splicing"Matrix Biol.. 20・8. 589-599 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] 吉岡秀克 他: "軟骨に発現するコラーゲン遺伝子の選択的スプライシング"Connective Tissue. (in press).

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] 住吉秀明 他: "XIX型コラーゲンに関する最近の知見"Connective Tissue. (in press).

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Saito K et al: "Differential expression of mouse α5(IV) and α6(IV) collagen gene"J.Biochem.. 128・3. 427-434 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Hirakawa S et al: "The brain link Protein-1 (BRALI)"Biochem. Biophys Res.Commun.. 276・3. 982-989 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Fujiwara S et al: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.Biol.Chem.. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Iyama K et al: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Sumiyosi H et al: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynam.. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 2000-04-01   更新日: 2016-04-21  

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