子宮頚がんにおける個性診断DNAチップの開発

• 研究課題/領域番号: 12877266
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 産婦人科学
• 研究機関: 東京慈恵会医科大学
• 研究代表者: 高田 全 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (40317970)
• 研究分担者: 岡本 愛光 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (20204026)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円); 2001年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 2000年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: 子宮頸がん / 子宮頚部上皮内腫瘍 / DNAチップ / Laser Capture Microdissection (LCM) / Laser Capture Microdissection(LCM)

研究概要

子宮頸がん患者10例、子宮頚部上皮内腫瘍10例よりmicrodissectionによりtotal RNAを抽出し、555種類の遺伝子についてcDNAマクロアレイ解析を行った。対照としておのおのの正常子宮頚部を用いた。その結果、共通の12種類の遺伝子発現変化を見いだした。またcDNAマクロアレイのセットアップとしてシスプラチン感受性、耐性卵巣がん細胞株を用い555種類の遺伝子についてcDNAマクロアレイ解析を行った。その結果、cDNAマクロアレイにおいては細胞株の発現変化の比較の容易さ、再現性といった点より、手術検体を用いる場合はさらなる改善策が必要であることがわかった。手術検体に必要な改善点は保存状態、組織中のheterogeneietyの問題、正常子宮頚部組織といってもその成分はほとんど間質組織であり上皮性子宮頸がんの真のコントロールは正常子宮頚部上皮である点である。現在われわれはRNA laterで保存後、OCTコンパウンドで保存し、Laser Capture Microdissection (LCMD)を用い、正常子宮頚部上皮細胞を1000細胞以上収集し、RNAを抽出、T7 based amplification後cDNAマイクロアレイ解析に供している。早期診断が予後決定に重要な子宮頸がんは細胞診、HPV感染の有無以外に悪性度を遺伝子発現プロフィールで診断する手だてがあれば早期に子宮頸がんの診断に寄与し、さらなる予後改善に貢献できる。今後われわれは子宮頚部異形上皮も含め子宮頸がんもLCMDにより病変のみを回収し、悪性度の診断、早期診断、化学療法剤感受性、耐性の診断、予後の把握、個人に適した治療法の選択に寄与できる遺伝子、EST(expressed sequence tags)をcDNAアレイ解析により明らかにし、子宮頸がんの個性診断オリジナルのcDNAチップまたはフィルターを開発する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Yamamoto K, Okamoto A, Isonishi S, Ochiai K, Ohtake Y.: "A novel gene, CRR9, which was up-regulated in CDDP-resistant ovarian tumor cell line, was associated with apoptosis"Biochem Biophys Res Commun. 280:. 1148-54 (2001)
• [文献書誌] Yamamoto K, Okamoto A, Isonishi S, Ochiai K, Ohtake Y.: "Heat shock protein27 was up-regulated in cisplatin resistant human ovarian tumor cell line and associated with the cisplatin resistance"Cancer Letters. 168:. 173-181 (2001)
• [文献書誌] Shinozaki H, Okamoto A, Shimizu K, Saito M, Yokota J, Ochiai K.: "Absence of p51 alteration in human ovarian cancer"Int.J.Oncology. 18:. 549-552 (2001)
• [文献書誌] Ono K, Tanaka T, Tsunoda T, Kitahara O, Kihara C, Okamoto A, Ochiai K, Takagi T, Nakamura Y.: "Identification by cDNA microarray of genes involved in ovarian carcinogenesis"Cancer Res,. 60,. 5007-5011 (2000)
• [文献書誌] Takakura S, Kohno T, Shimizu K, Ohwada S, Okamoto A, Yokota J.: "Somatic mutations and genetic polymorphisms of the PPP1R3 gene in patients with several types of cancers"Oncogene,. 19. 836-840 (2000)
• [文献書誌] Saito M, Okamoto A, Kohno T, Takakura S, Shinozaki H, Isonishi S, Yasuhara T, Tanaka T, Yoshimura T, Ohtake Y, Ochiai K, Yokota J: "Allelic imbalance and mutations of the PTEN gene in ovarian cancer"Int.J Cancer,. 85,. 160-165 (2000)
• [文献書誌] Kohno T, Takakura S, Yamada T, Okamoto A, Tanaka T, Yokota J.: "Alterations of the PPP1R3 gene in human cancer"Cancer Res,. 59,. 4170-4174 (1999)
• [文献書誌] Takano H, Okamoto A, Fukushima K, Ochiai K, Tanaka T.: "Low specificity of cytokeratin 19 mRNA expression in the peripheral blood cells from patients with ovarian tumors"Oncol Rep,. 7. 1023-1025 (2000)
• [文献書誌] Tagashira M, Kitagawa T, Isonishi S, Okamoto A, Ochiai K, Ohtake Y.: "Mithramycin represses MDR1 gene expression in vitro, modulating multidrug resistance"Biol Pharm Bull,. 23,. 926-929 (2000)
• [文献書誌] Tagashira M, Kitagawa T, Nozato N, Isonishi S, Okamoto A, Ochiai K, Ohtake Y.: "Two novel C-glycosides of aureolic acid repress transcription of the MDR1 gene"Chem Pharm Bull,. 48,. 575-578 (2001)