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HSP72相互作用解析に基づいた新規腫瘍マーカースクリーニング法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 12J02543
研究種目

特別研究員奨励費

配分区分補助金
応募区分国内
研究分野 腫瘍診断学
研究機関大阪市立大学

研究代表者

田中 昌子  大阪市立大学, 大学院医学研究科, 特別研究員(DC2)

研究期間 (年度) 2012 – 2013
研究課題ステータス 完了 (2013年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2013年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2012年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
キーワードプロテオミクス / 腫瘍マーカー / 熱ショックタンパク質 / 多発性骨髄腫
研究概要

近年、熱ショックタンパク質72(HSP72)が腫瘍特異抗原と結合したまま、細胞外へと放出されることが報告された。そこで、本研究では血中のHSP72と結合するタンパク質を質量分析計にて同定および比較解析することで、多発性骨髄腫のマーカー探索を試みた。2年目の目標は、1年目に確立した血中のHSP72複合体単離法(NHq法)により同定したマーカー候補分子が、多発性骨髄腫のマーカーとして妥当であるか検証することである。
1. マーカー候補タンパク質とHSP72の結合確認
1年目に同定された4つの候補分子のうち、2分子についてHSP72との結合を確認したところ、マーカーとなり得る分子が全長タンパク質だけではなく、断片化したフラグメントタンパク質である可能性が示唆された。さらに多発性骨髄腫の培養細胞を用いて解析したところ、全長タンパク質は主に細胞内でHSP72と結合しているが、フラグメントタンパク質は細胞内外でHSP72と結合していた。以上より、HSP72に結合するフラグメントタンパク質は腫瘍細胞から積極的に分泌されている可能性がある。
2. ELISAによる定量解析および疾患特異性の評価
全長タンパク質として検出されたHistone H4の血中濃度をELISA法にて定量し、健常者22例、多発性骨髄腫患者30例、その他血液疾患患者30例において比較解析した。その結果、3群に有意な差は見られず、Histone H4は多発性骨髄腫特異的なマーカーとしては妥当でないことが明らかとなった。また、すべての群において、血清中のHSP72レベルとHistone H4レベルに相関は見られなかった。
3. 患者検体数を増やした再スクリーニング
質量分析による同定精度を高めるために、患者検体数を10例に増やし、マーカー候補分子の再スクリーニングを行った。その結果、10例すべての患者から同定されたタンパク質が3つであった。その中から最も同定精度の高かったTim13について解析を進めている。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

血中の微量タンパク質の同定法としてNHq法を確立し特許出願に至った。しかし、本手法により同定した多発性骨髄腫マーカー候補分子4つのうち、全長タンパク質として検出した分子は1つであり、その血中レベルは患者と健常者の群間比較において有意差がなかった。

今後の研究の推進方策

同定した多発性骨髄腫マーカー候補分子のうち3分子は断片化しているため、市販のELISAキットによる定量は困難である。そこで、フラグメントタンパク質の抗体を作製し、NHq法を改良したELISAシステムにより候補分子の血中レベルを定量する。また、患者検体数を増やした再スクリーニングにより新たな候補分子を同定し、HSP72との結合を確認している。新候補分子についても血中レベルを定量し、健常者群、その他血液疾患患者群と比較し、多発性骨髄腫のマーカーとして妥当か検討する。

報告書

(2件)
  • 2013 実績報告書
  • 2012 実績報告書
  • 研究成果

    (19件)

すべて 2014 2013 2012

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (13件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Hsc70 contributes to cancer cell survival by preventing RablA degradation under stress conditions2014

    • 著者名/発表者名
      Tanaka M, Mun S, Harada A, Ohkawa Y. Inagaki A, Sano S, Takahashi K, Izumi Y, Osada-Oka M, Wanibuchi H, Yamagata M, Yukimura T, Miura K, Shiota M, Iwao H.
    • 雑誌名

      PLOS ONE

      巻: (in press)

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Fibroblast growth factor-2 anchoring on plasma membrane is critical for endothelial cell survival2014

    • 著者名/発表者名
      Tanaka M, Yamaguchi M, Kawamoto Y, Takahashi K, Inagaki A, Osada-Oka M, Harada A, Wanibuchi H, Izumi Y, Miura K, Shiota M, Iwao H, Ohkawa Y.
    • 雑誌名

      Monoclon Antib Immunodiagn Immunother.

      巻: (in press)

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] HSP72ファミリーの新たな機能2014

    • 著者名/発表者名
      塩田正之、田中昌子
    • 雑誌名

      日本薬理学雑誌

      巻: (in press)

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [雑誌論文] Lipid synthesis is promoted by hypoxic adipocyte-derived exosomes in 3T3-L1cells2014

    • 著者名/発表者名
      Sano S, Izumi Y, Yamaguchi T, Yamazaki T, Tanaka M, Shiota M, Osada-Oka M, Nakamura Y, Wei M, Wanibuchi H, Iwao H, Yoshiyama M.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun.

      巻: 445 号: 2 ページ: 327-33

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2014.01.183

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Establishment of a 5-fluorouracil-resistant triple-negative breast cancer cell line2013

    • 著者名/発表者名
      Takahashi K, Tanaka M, Inagaki A, Wanibuchi H, Izumi Y, Miura K, Nagayama K, Shiota M, Iwao H.
    • 雑誌名

      Int J Oncol.

      巻: 43 号: 6 ページ: 1985-91

    • DOI

      10.3892/ijo.2013.2135

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 胃癌細胞株においてHsp72はオキサリプラチン耐性の獲得に寄与する2014

    • 著者名/発表者名
      髙橋 克之
    • 学会等名
      第87回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      仙台国際センター(仙台)
    • 年月日
      2014-03-21
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] ハイポキシアでのマクロファージ由来エキソソームと血管内皮細胞障害2014

    • 著者名/発表者名
      岡 真優子
    • 学会等名
      第87回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      仙台国際センター(仙台)
    • 年月日
      2014-03-20
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 細胞外HSP72結合分子の同定2014

    • 著者名/発表者名
      川口 真紗子
    • 学会等名
      第87回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      仙台国際センター(仙台)
    • 年月日
      2014-03-20
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 肺がん細胞における細胞外HSP72結合タンパク質の同定2013

    • 著者名/発表者名
      川口 真紗子
    • 学会等名
      第36回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      神戸国際会議場(神戸)
    • 年月日
      2013-12-05
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] HSP72結合解析による多発性骨髄腫診断マーカーの探索2013

    • 著者名/発表者名
      田中 昌子
    • 学会等名
      第72回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(横浜)
    • 年月日
      2013-10-04
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 抗癌耐性トリプルネガティブ乳癌がんのプロテオーム解析2013

    • 著者名/発表者名
      髙橋 克之
    • 学会等名
      第72回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(横浜)
    • 年月日
      2013-10-03
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 腫瘍マーカー探索のためのHSP72結合解析による血中微量タンパク質同定法の確立2013

    • 著者名/発表者名
      塩田 正之
    • 学会等名
      第72回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(横浜)
    • 年月日
      2013-10-03
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 血中Hsp72を用いたバイオマーカー探索2013

    • 著者名/発表者名
      植村 遼
    • 学会等名
      第123回日本薬理学会近畿部会
    • 発表場所
      名古屋国際会議場(名古屋)
    • 年月日
      2013-07-12
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 血中Hsp72結合分子を同定し、多発性骨髄腫に対する新規診断マーカーを探索する2013

    • 著者名/発表者名
      西智史
    • 学会等名
      第86回 日本薬理学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県)
    • 年月日
      2013-03-23
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] 疾患プロテオミクスのための血中HSP72結合分子の単離2013

    • 著者名/発表者名
      植村遼
    • 学会等名
      第86回 日本薬理学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県)
    • 年月日
      2013-03-23
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] HSC70-targeted proteomics revealed the association of RAB1A with stress response in cancer cells.2013

    • 著者名/発表者名
      Masako Tanaka
    • 学会等名
      第86回 日本薬理学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県)
    • 年月日
      2013-03-21
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] 癌のストレス応答を標的としたHsc70クライアントタンパク質のプロテオーム解析2012

    • 著者名/発表者名
      田中昌子
    • 学会等名
      第71回 日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      ロイトン札幌(北海道)
    • 年月日
      2012-09-19
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] 分子シャペロンHsc70を標的とした癌のストレス応答分子同定法の確立2012

    • 著者名/発表者名
      田中昌子
    • 学会等名
      第121回 日本薬理学会近畿支部
    • 発表場所
      あわぎんホール(徳島県)
    • 年月日
      2012-06-29
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [産業財産権] 形質細胞性腫瘍を検出するための方法、キット及びマーカー2013

    • 発明者名
      塩田正之
    • 権利者名
      大阪市立大学
    • 産業財産権番号
      2013-045581
    • 出願年月日
      2013-03-07
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書

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公開日: 2013-04-25   更新日: 2024-03-26  

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