B細胞の抗体産生とアポトーシスを制御する新規遺伝子in vivoにおける機能

• 研究課題/領域番号: 13037035
• 研究種目: 特定領域研究
• 配分区分: 補助金
• 審査区分: 生物系
• 研究機関: 千葉県がんセンター(研究所)
• 研究代表者: 王 継揚 千葉がんセンター, 病理研究部, 研究員 (80231041)
• 研究分担者: 幡野 雅彦 千葉大学, 大学院・医学研究院・分化制御, 助教授 (20208523) ; 田川 雅敏 千葉がんセンター, 病理研究部, 部長 (20171572)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 5,100千円 (直接経費: 5,100千円); 2002年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円); 2001年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
• キーワード: 免疫学 / 遺伝子 / リンパ球 / アポトーシス / シグナル伝達

研究概要

平成14年度は、引き続き活性化B細胞で発現誘導される遺伝子Clast3と発現抑制される遺伝子Clast5の機能解析を行った。Clast3の発現をantisense oligoで抑制すると、分裂中期の細胞がアポトーシスに陥ることが判明した。逆に、Clast3を強発現させた細胞では、細胞の異常分裂を伴うDNAの倍数化現象と多核形成が誘導された。これらの結果より、Clast3は正常な細胞分裂に必須であるが、その発現は細胞周期依存性に厳密に制御されていなければならないことがわかった。一方、Clast5のin vivoにおける機能を明らかにするために、トランスジェニックマウス(Tg)を作製し、解析を行った。Clast5-Tgでは、体重はコントロールと変わりないものの、脾臓や胸腺が小さく、脾細胞数、胸腺細胞数ともには約半分以下に減少していた。また,Clast5-Tgの胸腺においては、CD44^+25^+のPro-T及びCD44^-25^+のPre-T細胞が減少し、初期T細胞の分化、増殖が阻害されていた。骨髄ではPro-B及びPre-B細胞が明らかに減少し、初期B細胞分化が著しく障害されていることが分かった。種々の刺激に対する脾細胞の増殖反応を調べたところ、Clast5-Tgでは、CD40 ligand(CD40L),抗IgM抗体,抗CD3抗体,Con-Aなどに対する反応性が低下していた。また骨髄では、IL-7に対する反応性が低くなっていた。さらに、Clast5-TgマウスをDNP-OVAで免疫した結果、12日目の脾臓ではB220^+PNA^+の胚中心B細胞が減少していた。以上の結果より、Clast5は抗IgM抗体、CD40L、IL4などの刺激によりその発現が速やかに抑制されること、また、強制発現させると、B及びTリンパ球の活性化が障害されることが判明した。従って、Clast5はB及びT細胞抗原レセプターをはじめ、様々な補助刺激分子やサイトカインレセプターからのシグナルの核内ターゲットで、リンパ球の活性化の閾値を決定する転写因子であることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Mitsui, T., O-Wang, J.et al.: "Hypertension and angiotensin II hypersensitivity in aminopeptidase A-deficient mice"Mol.Med. (in press).
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J.et al.: "T cell-dependent antitumor effects produced by CD4O ligand expressed on mouse lung carcinoma cells are linked with the maturation of dendritic cells and secretion of a variety of cytokines"Cancer Gene Ther.. (in press).
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J.et al.: "Fas ligand-expressing tumors induce tumor-specific protective immunity in the inoculated hosts but vaccination with the apoptotic tumors suppresses antitumor immunity"Cancer Gene Ther.. (in press).
• [文献書誌] Seimuya, M., O-Wang, J.etal.: "Stage-specific expression of Clast6/E3/LAPTM5 during B cell differentiation: ubiquitous expression in human B lymphomas"Int.J.Oncol.. 22. 301-304 (2003)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J.et al.: "A novel role for Fas ligand in facilitating antigen acquisition by dendritic cells"J.Immunal.. 169. 2241-2245 (2002)
• [文献書誌] Bahar, R., O-Wang, J.etal.: "Growth retardation, polyploidy and multinucleation induced by Clast3, a novel cell cycle-regulated protein"J.Biol.Chem.. 277. 40012-40019 (2002)
• [文献書誌] O-Wang, J., Kajiwara, K.et al.: "An essential role for REV3 in mammalian cell survival : absence of REV3 induces p53-independent embryonic death"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 293. 1132-1137 (2002)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J.et al.: "Antitumor effects are produced by forced expression of membrane-bound by not soluble Fas ligand in murine lung carcinoma cells"Anticancer.Res.. 22. 831-836 (2002)
• [文献書誌] Seimuya, M., O-Wang, J.etal.: "Clast5/Stra13 is a negative regulator of B lymphocyte activation"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 292. 121-127 (2002)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J.et al.: "Expression of the TNF-(alpha) gene on mouse lung carcinoma cells suppresses spontaneous lung metastasiswithout affecting tumorigenicity"OncolOgy Report. 9. 585-588 (2002)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J.et al.: "T cell dependent and independent antitumor immunity generated by the expression of Fas ligand on mouse lung carcinoma cells"Int.J.Mol.Med.. 9. 281-285 (2002)
• [文献書誌] Kawamura, K., O-Wang, J. et al.: "The error-prone DNA polymerase ζ catalytic subunit (Rev3) gene is ubiquitously expressed in normal and malignant human tissues"Int.J.Oncology. 18. 97-103 (2001)
• [文献書誌] Kawamura, K., O-Wang, J. et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase ζ is required for normal embryogenesis"Genes to Cells. 6. 99-106 (2001)
• [文献書誌] O-Wang, J., Kawamura, K., et al.: "DNA polymerase κ, implicated in spontaneous and DNA damage-induced mutagenesis,is overexpressed in lung cancer"Cancer Res.. 61. 5366-5369 (2001)
• [文献書誌] Maeda, T., O-Wang, J. et al.: "A minimum c-erbB-2 promoter-mediated expression of herpes simplex virus-thymidine kinase gene confers selective cytotoxicity of human breast cancer cells to ganciclovir"Cancer Gene Ther.. (in press). (2002)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J. et al.: "Antitumor effects are produced by forced expression of membrane-bound by not soluble Fas ligand in murine lung carcinoma cells"Anticancer Res.. (in press). (2002)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J. et al.: "T cell dependent and independent antitumor immunity generated by the expression of Fas ligand on mouse lung carcinoma cells"Int.J.Mol.Med.. (in press). (2002)
• [文献書誌] Tada, Y., O-Wang, J. et al.: "Expression of the TNF-α (alpha) gene on mouse lung carcinoma cells suppresses spontaneous lung metastasis without affecting tumorigenicity"Oncology Report. (in press). (2002)
• [文献書誌] Seimiya, M., O-Wang, J. et al.: "Clast5/Stral3 is a negative regulator of B lymphocyte activation"Biochem.Biophy.Res.Comm.. (in press). (2002)