| 研究概要 |
1)Wee1Hu(Wee1A)タンパク質の分解機構の解析
プロテアソーム活性阻害剤(LLnL)による解析によりWee1Huの細胞周期を通じた分解はプロテアソーム依存に行われていることを明らかにした.
プロテインキナーゼ触媒領域(catalytic domain)のN端側の外側のアミノ酸配列がプロテアソーム依存分解に必要であることを,欠失変異させたWee1を導入する解析により,明らかにした.さらにこの領域に存在するリジンをアルギニンに変異させると,Wee1のユビキチン化が著しく減少し,LLnLによるWee1タンパク質量の増大が起こらなくなったことから,この領域のリジンのユビキチン化が間期におけるWee1の分解に必須であることを明らかにした.
2)Wee1Hu(Wee1A)タンパク質の分解とG2/Mチェックポイント
DNA複製阻害,DNA損傷などM期開始を阻止する刺激(G2/Mチェックポイント刺激)により,細胞のWee1量は増加する.プロテアソーム依存のWee1の分解機構がG2/Mチェックポイント刺激と関連するものか否かの解析を行った.細胞をG1/S期に同調しDNA損傷を与えた後,S期に進入させ,同時にLLnL処理を行った.あるいは,S期に進入させずにDNA複製阻害剤を与え続け,同時にLLnL処理を行った.これらのどちらの場合にも,少なくともM期進入以前には,LLnL処理によるWee1タンパク質量の増加が対照と同様に認められた.従って,間期におけるプロテアソーム依存Wee1分解はDNA複製阻害,DNA損傷などM期開始を阻止する刺激(G2/Mチェックポイント刺激)に影響されないことが明らかになった.
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