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フィールド保全遺伝学のための調査・解析手法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 13308013
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 統計科学
研究機関東京大学

研究代表者

岸野 洋久  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (00141987)

研究分担者 林 武司  独立法人農業生物資源研究所, ゲノム研究グループ, 研究員
北田 修一  東京海洋大学, 大学院・水産学研究科, 教授 (10262338)
鷲谷 いづみ  東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (40191738)
中道 礼一郎  医科学研究所, ヒトゲノムセンター, 特別研究員(PD)
立田 晴記  国立環境研究所, 生態リスク評価研究室, 研究員 (50370268)
研究期間 (年度) 2001 – 2003
研究課題ステータス 完了 (2003年度)
配分額 *注記
46,410千円 (直接経費: 35,700千円、間接経費: 10,710千円)
2003年度: 14,950千円 (直接経費: 11,500千円、間接経費: 3,450千円)
2002年度: 13,650千円 (直接経費: 10,500千円、間接経費: 3,150千円)
2001年度: 17,810千円 (直接経費: 13,700千円、間接経費: 4,110千円)
キーワード希少集団と遺伝的浮動 / 集団構造と連鎖不平衡 / 近交弱勢と分離比の歪み / 他殖性生物のQTL解析 / 多型マーカー / ウイルス分子進化 / 進化速度の変化 / 有効花粉輸送距離と父性解析 / 受粉パターンと種子生産 / 他殖性植物のQTL解析 / ハマダラカの遺伝子交流 / バッタ交雑帯と遺伝的隔離
研究概要

フィールドワークを主体とする研究者と、統計モデル構築を専門とする研究者が協力してデータ取得からデータ解析まで一貫しておこなうことで、実測データと統計モデル構築の統合を目指した。具体的には、次のような成果を得た。
1.微小生物のリスク管理:ウイルスの分子進化を調べるための最適サンプリング計画を検討し、有効な集団の大きさと進化速度を同時推定する方法を開発した。これによりHIV-1 env遺伝子を解析したところ、潜伏期間において両者の間に負の相関が認められた。また、バクテリアにおける水平伝搬に焦点を当てて、進化速度の変動するパターンを調べた。
2.希少植物としてのサクラソウ:分子マーカーに基づく他殖性生物のQTL解析の方法を開発した。花器形質や開花フェノロジーの形質を効果的にQTLマッピングするための実験的手法を確立した.父性解析により、サクラソウの花粉と種子を通じた遺伝子流動の実態を明らかにした。
3.マラリア原虫のベクターであるハマダラカ:東南アジアの各地からハマダラカを採集し、ミトドリアCOI, COII遺伝子配列およびマイクロサテライトの集団遺伝学的な解析により、遺伝子流動の様相と集団の履歴を、地史・人類史と関連づけつつ推測した。
4.スペインにおけるヒナバッタの交雑帯:交雑帯周辺地域より個体を採集し、交配飼育実験を行った。生殖前隔離の遺伝構造を解析するために、鳴き声を定量化し、AFLPをタイピングした。またこれらのデータを大量に解析するために、音声解析ソフト、AFLPタイピングソフトを開発した。
5.栽培漁業における保全遺伝:放流魚の天然資源に対する遺伝的影響を推定するために、経験ベイズによる集団構造推定法を開発し、マダイのmtDNAのデータを解析した。集団構造がある場合の連鎖不平衡と遺伝的分化の同時推定法を開発し、アユのアイソザイムとヒトSNPデータを解析した。

報告書

(4件)
  • 2003 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2002 実績報告書
  • 2001 実績報告書
  • 研究成果

    (95件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (95件)

  • [文献書誌] Kishino, H., Thorne, J.L., Bruno, W.J.: "Performance of a divergence time estimation method under a probabilistic model of rate evolution."Molecular Biology and Evolution. 18. 352-361 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Nagata, M., Sugiwakam, K., Kitada, S.: "Commercial harvest of hatchery-reared masu salmon Oncorhynchus masousmolts estimated by a coast-wide sampling program in Hokkaido, northern Japan, and the two-stage sampling schemes of landings."Fishery Science.. 67. 126-133 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Nagata, M., Kitada, S.: "Effect of smolt size on post-release survival of hatchery-reared masu salmon Oncorhynchus masou."Fishery Science. 67. 134-137 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Nagata, M., Take, Kitada, S.: "Effectiveness of stocking masu salmon Oncorhynchus masou fry as a mean of increasing commercial catches."Fishery Science. 67. 1184-1186 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamichi, R., Ukai, Y., Kishino, H.: "Resolving of closely linked quantitative trait loci with a genetic algorithm."Genetics.. 158. 463-475 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tatsuta, H., Butlin, R.K.: "Amplified fragment length polymorphism for assessing genetic structure in grasshopper populations."Journal of Orthoptera Research.. 10. 203-207 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Waddell, P.J., Kishino, H., Ota, R.: "A phylogenetic foundation for comparative mammalian genomics."Genome Informatics Series. 12. 141-151 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Washitani, I.: "Plant conservation ecology for management and restoration of riparian habitats of lowland Japan"Population Ecology. 43. 189-195 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 北田修一, 関谷幸生, 横田賢史: "水槽実験によるPetersen法の実用性の検討"日本水産学会誌. 67. 203-208 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 夏目雅史, 北田修一, 國廣靖志, 木下貴裕: "標識再捕に基づくオホーツク海南部におけるキチジの資源量推定"日本水産学会誌. 67. 821-828 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi, T., Awata, T., Yasue, H.: "On the efficiency of composite interval mapping in an outbred population."Gene & Genetic Systems. 77. 209-217 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitada, S., Tezuka, K.: "Longitudinal logbook survey designs for estimating recreational fishery catch with application to ayu (Plecoglossus altivelis)."Fishery Bulletin.. 100. 228-243 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsumura, C., Washitani, I.: "Heterostylous morph differences in pollen transfer and deposition patterns in Primula sieboldii on a visitation by a que with a semi-natural experimental system."Plant Species Biology. 17. 1-12 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohizumi, H., Matsuishi, T., Kishino, H.: "Winter sightings of humpback and Bryde's whales in tropical waters of western and central North Pacific."Aquatic Mammals. 28. 73-77 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo, T.-K., Thorne, J.L., Hasegawa, M., Kishino, H.: "A viral sampling design for testing the molecular clock and for estimating evolutionary rates and divergence times."Bioinformatics.. 18. 115-123 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo, T.-K., Thorne, J.L., Hasegawa, M., Kishino, H.: "Estimation of effective population size of HIV-1 within a host : A pseudo-maximum likelihood approach."Genetics.. 160. 1283-1293 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Thorne, J.L., Kishino, H.: "Divergence time and evolutionary rate estimation with multilocus data."Systematic Biology. 51. 689-702 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Waddell, P.J., Kishino, H., Ota, R.: "Very fast algorithms for evaluating the stability of ML and Bayesian phylogenetic trees."Genome Informatics Series. 13. 82-92 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 安藤大成, 宮腰靖之, 竹内勝巳, 永田光博, 佐藤孝弘, 柳井清治, 北田修一: "都市近郊の河川におけるサクラマス幼魚の遊漁による釣獲尾数の推定"日本水産学会誌. 68. 52-60 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 岸野洋久, Thorne, J.L.: "分子進化速度のベイズ型階層モデル"統計数理. 50. 17-31 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 立田晴記: "Blaesoxipha grisea Meigen (Diptera : Sarcophagidae)の寄主初記録"Japanese Journal of Entomology (New Series). 5. 120-120 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hasegawa, M., Thorne, J.L., Kishino, H.: "Time scale of eutherian evolution estimated without assuming a constant rate of molecular evolution."Gene & Genetic Systems.. 78. 267-283 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ishihama, F., Nakano, C., Ueno, S., Ajima, M., Tsumura, Y., Washitani, I.: "Seed set and gene flow patterns in an experimental population of an endangered heterostylous herb with controll density."Functional Ecology. 17. 680-689 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakano, C, Washitani, I.: "Variability and specialization of plant-pollinator systems in a northern maritime grassland."Ecological Research. 18. 221-246 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Robinson, D.M., Jones, D.T., Kishino, H., Goldman, N., Thorne, J.L.: "Protein evolution with dependence among codons due to tertiary structure."Molecular Biology and Evolution.. 20. 1692-1704 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Okayama, Y., Nagai, M., Washitani, I.: "Testing the 'assortative mating' hypothesis on a variation maintenance mechanism for flowering time within a forest-floor population of Primula sieboldii."Plant Species Biology. 18. 1-11 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tatsuta, H., Makino, S.: "Rate of Strepsipteran parasization among overwintered females of the hornet Vespa analis (Hymenoptera : Vespidae)."Environmental Entomology. 32. 175-179 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ueno, S., Tsumura, Y., Washitani, I.: "Cost-effective method to synthesize fluorescently labeled DNA size standards using cloned AFLP fragments."Bio Techniques.. 34. 1-3 (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ueno, S., Washitani, I., Tsumura, Y.: "Development of microsatellite markers in Primula sieboldii E.Morren, a threatened Japanese perennial herb."Conservation Genetics.. 4. 809-811 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Zhang, Z., Inomata, N., Yamazaki, Y., Kishino, H.: "Evolutionary history and mode of the amylase multigene family in Drosophila."Journal of Molecular Evolution. 57. 702-709 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 鷲谷いづみ: "サクラソウ・エコゲノム・プロジェクト-遺伝子の多様性を考慮した野生植物保全戦略の構築に向けて-"環境研究. 129. 70-75 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitada, S., Kishino, H.: "Simultaneous detection of linkage disequilibrium and genetic differentiation of subdivided populations."Genetics.. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Koyama, T., Aoyama, T., Sakakibara, S., Kitada, S.: "Estimates of numbers of masu salmon caught by recreational fishermen in the coastal area off Iburi, Hokkaido, Japan."Fishery Science. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Noda, H., Muraoka, H., Washitani, I.: "Morphological and physiological acclimation responses to contrasting light and water regimes in Primula sieboldii, an endangered clonal herb in Japan."Ecological Research. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo, T.-K., Kishino, H., Thorne, J.L.: "Estimating absolute rates of synonymous and nonsynonymous nucleotide substitution in order to characterize natural selection and date species divergences."Molecular Biology and Evolution.. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tatsuta, H., Mizota, K., Akimoto, S.: "Relationship between size and shape in the sexually dimorphic beetle Prosopocoilus inclinatus (Coleoptera : Lucanidae)"Biological Journal of the Linnean Society. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Watanabe, A., Goka, K., Washi: "Effects of population spatial structure on the quantity and quality of seeds set by Primula sieboldii (Primulaceae)."Plant Species Biology. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wiegmann, B.M., Yeates, D.K., Thorne, J.L., Kishino, H.: "Time flies, a new molecular time-scale for brachyceran fly evolution without a clock."Systematic Biology. 52. 745-756 (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Zhang, Z., Kishino, H.: "Genomic background drives the divergence at synonymous sites of duplicate amylase genes in Drosophila."Molecular Biology and Evolution. (印刷中). (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Zhang, Z., Kishino, H.: "Genomic background predicts the fate of duplicated genes : evidence from the yeast genome."Genetics.. 166. 1995-1999 (2004)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 岸野洋久: "生のデータを料理する:データの科学における調査とモデル化"日本評論社. 245 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 岸野洋久, 浅井潔: "生物配列の統計"岩波書店. 264 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kishino, H., Thorne, J.L., Bruno, W.J.: "Performance of a divergence time estimation method under a probabilistic model of rate evolution."Molecular Biology and Evolution. 18. 352-361 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Nagata, M., Sugiwakam, K, Kitada, S.: "Commercial harvest of hatchery-reared masu salmon Oncorhynchus masousmolts estimated by a coast-wide sampling program in Hokkaido, northern Japan, and the two-stage sampling schemes of landings."Fishery Science.. 67. 126-133 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Nagata, M., Kitada, S.: "Effect of smolt size on post-release survival of hatchery-reared masu salmon Oncorhynchus masou."Fishery Science. 67. 134-137 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Nagata, M., Takeuchi, K., Sugiwakam, K., Kitada, S.: "Effectiveness of stocking masu salmon Oncorhynchus masou fry as a mean of increasing commercial catches."Fishery Science. 67. 1184-1186 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamichi, R., Ukai, Y., Kishino, H.: "Resolving of closely linked quantitative trait loci with a genetic algorithm."Genetics. 158. 463-475 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tatsuta, H., Butlin, R.K.: "Amplified fragment length polymorphism for assessing genetic structure in grasshopper populations."Journal of Orthoptera Research. 10. 203-207 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Waddell, P.J., Kishino, H., Ota, R.: "A phylogenetic foundation for comparative mammalian genomics."Genome Informatics Series. 12. 141-154 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Washitani, I.: "Plant conservation ecology for management and restoration of riparian habitats of lowland Japan."Population Ecology.. 43. 189-195 (2001)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi, T., Awata, T., Yasue, H.: "On the efficiency of composite interval mapping in an outbred population."Gene & Genetic Systems. 77. 209-217 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitada, S., Tezuka, K.: "Longitudinal logbook survey designs for estimating recreational fishery catch with application to ayu (Plecoglossrrs altivelis)."Fishery Bulletin.. 100. 228-243 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsumura, C., Washitani, I.: "Heterostylous morph differences in pollen transfer and deposition patterns in Primula sieboldii on a visitation by a queen bumblebee, measured with a semi-natural experimental system."Plant Species Biology. 17. 1-12 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohizumi, H., Matsuishi, T., Kishino, H.: "Winter sightings of humpback and Bryde's whales in tropical waters of western and central North Pacific."Aquatic Mammals. 28. 73-77 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo, T.-K., Thorne, J.L., Hasegawa, M., Kishino, H.: "A viral sampling design for testing the molecular clock and for estimating evolutionary rates and divergence times."Bioinfrmatics.. 18. 115-123 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Seo, T.-K., Thorne, J.L., Hasegawa, M., Kishino, H.: "Estimation of effective population size of HIV-1 within a host : A pseudo-maximum likelihood approach."Genetics.. 160. 1283-1293 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Thorne, J.L., Kishino, H.: "Divergence time and evolutionary rate estimation with multilocus data."Systematic Biology. 51. 689-702 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Waddell, P.J., Kishino, H., Ota, R.: "Very fast algorithms for evaluating the stability of ML and Bayesian phylogenetic trees."Genome Informatics Series. 13. 82-92 (2002)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hasegawa, M., Thorne, J.L., Kishino, H.: "Time scale of eutherian evolution estimated without assuming a constant rate of molecular evolution."Gene & Genetic Systems. 78. 267-283 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ishihama, F., Nakano, C., Ueno, S., Ajima, M., Tsumura, Y., Washitani, I.: "Seed set and gene flow patterns in an experimental population of an endangered heterostylous herb with controlled local opposite-morph density"Functional Ecology.. 17. 680-689 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakano, C., Washitani, I.: "Variability and specialization of plant-pollinator systems in a northern maritime grassland."Ecological Research.. 18. 221-246 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Robinson, D.M., Jones, D.T., Kishino, H., Goldman, N., Thorne, J.L.: "Protein evolution with dependence among colons due to tertiary structure."Molecular Biology and Evolution. 20. 1692-1704 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Okayama, Y., Nagai, M., Washitani, I.: "Testing the 'assortative mating' hypothesis on a variation maintenance mechanism for flowering time within a forest-floor population of Primula sieboldii."Plant Species Biology. 18. 1-11 (2003)

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  • [文献書誌] Tatsuta, H., Makino, S.: "Rate of Strepsipteran Parasitization among Overwintered Females of the Hornet Vespa analis (Hymenoptera: Vespidae)."Environmental Entomology. 32. 175-179 (2003)

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  • [文献書誌] Ueno, S., Tsumura, Y., Washitani, I.: "Cost-effective method to synthesize fluorescently labeled DNA size standards using cloned AFLP fragments."BioTechniques. 34. 1-3 (2003)

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  • [文献書誌] Ueno, S., Washitani, I., Tsumura.Y.: "Development of microsatellile markers in Primula sieboldii E.Morren, a threatened Japanese perennial herb."Conservation Genelics.. 4. 809-811 (2003)

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  • [文献書誌] Zhang, Z., Inomata, N., Yamazaki, Y., Kishino, H.: "Evolutionary history and mode of the amylase multigene family in Drosophila. Journal of Molecular Journal of Molecular"Evolution. 57. 702-709 (2003)

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      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitada, S., Kishino, H.: "Simultaneous detection of linkage disequilibrium and genetic differentiation of subdivided populations."Genetics. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Miyakoshi, Y., Koyama, T., Aoyama, T., Sakakihara, S., Kitada, S: "Estimates of numbers of masu salmon caught by recreational fishermen in the coastal area off Iburi, Hokkaido, Japan."Fishery Science. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Noda, H., Muraoka, H., Washitani, I.: "Morphological and physiological acclimation responses to contrasting light and water regimes in Primula sieboldii, an endangered clonal herb in Japan."Ecological Research. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Seo, T.-K., Kishino, H., Thorne, J.L.: "Estimating absolute rates of synonymous and nonsynonymous nucleotide substitution in order to characterize natural selection and date species divergences."Molecular Biology and Evolution. (accepted). (2004)

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  • [文献書誌] Tatsuta, H., Mizota, K., Akimoto, S.: "Relationship between size and shape in the sexually dimorphic beetle Prosopocoilus inclinatus (Coleoptera : Lucanidae)."Biological Journal of the Linnean Society. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Watanabe, A., Goka, K., Washitani, I.: "Effects of population spatial structure on the quantity and quality of seeds set by Primula sieboldii (Primulaceae)."Plant Species Biology. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Wiegmann, B.M., Yeates, D.K., Thorne, J.L., Kishino, H.: "Time flies, a new molecular time-scale for brachyceran fly evolution without a clock."Systematic Biology. 52. 745-756 (2004)

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  • [文献書誌] Zhang, Z., Kishino, H.: "Genomic background drives the divergence at synonymous sites of duplicate amylase genes in Drosophila."Molecular Biology and Evolution.. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Zhang, Z., Kishino, H.: "Genomic background predicts the fate of duplicated genes : evidence from the yeast genome."Genetics.. 166. 1995-1999 (2004)

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  • [文献書誌] Kitada, S., Kishino, H.: "Simultaneous detection of linkage disequilibrium and genetic differentiation of subdivided populations."Genetics. (accepted). (2004)

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      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Noda, H., Muraoka, H., Washitani, I.: "Morphological and physiological acclimation responses to contrasting light and water regimes in Primula sieboldii, an endangered clonal herb in Japan."Ecological Research. (in press). (2004)

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  • [文献書誌] Ueno SI, Washitani I, Tsumura Y: "Development of microsatellite markers in Primula sieboldii E. Morren, a threatened Japanese perennial herb"Conservation Genetics. (in press). (2003)

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  • [文献書誌] Nakano C, Washitani I: "Variability and specialization of plant-pollinator systems in a northern maritime grassland"Ecological Research. (in press). (2003)

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  • [文献書誌] Kitada S, Kishino H: "Empirical Bayes estimation of genetic differentiation among populations : Examining genetic effect hypotheses of hatchery fish on wild populations"In : Proccedings of the second international symposium on stock enhancement and sea ranching (Eds.K.M.Leber KM et al.), Blackwell Science, Oxford.. (in press). (2003)

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  • [文献書誌] Tatsuta H., Butlin RK: "Amplified fragment length polymorphism for assessing genetic structure in grasshopper populations"Journal of Orthoptera Research. 10-2. 203-207 (2002)

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  • [文献書誌] Isagi Y., Honjo M., Washitani I.: "Development of microsatellite markers for Primula sieboldii using degenerate oligonucleotide-primed PCR-amplified DNA"Molecular Ecology Notes. 1. 22-24 (2001)

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公開日: 2001-04-01   更新日: 2016-04-21  

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