| 研究課題/領域番号 |
13470041
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
病態医化学
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| 研究機関 | 高知大学 |
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研究代表者 |
麻生 悌二郎 高知大学, 医学部, 教授 (20291289)
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| 研究分担者 |
北嶋 繁孝 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30186241)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
11,100千円 (直接経費: 11,100千円)
2004年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2003年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2002年度: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
2001年度: 3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
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| キーワード | Elongin / 転写伸長 / VHL癌抑制遺伝子 / RNAポリメラーゼII / ジーンターゲティング / ES細胞 / ノックアウトマウス / アポトーシス / 細胞早期老化 / p53 / p38 MAPK / エロンガン / 散発性腎癌 / 分化 / von Hippel-Lindau病 / VHL癌抑制蛋白 |
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| 研究概要 |
1.エロンガンAノックアウト細胞の作製と表現型の解析
定法によりエロンガンAを欠失したES細胞を作製した。ヘテロ欠失細胞は野生型と同様の性状を示したが、ホモ欠失細胞では、増殖速度が約1/3に低下し、細胞サイズの増大と多倍数体の比率の増加を認めた。FACS等による解析の結果、これらはdelayed mitosisに基づくことが判明した。また、野生型とホモ欠失細胞間でDNAマイクロアレイを実施したところ、一群(5%以下)の遺伝子の発現量にのみ有意な差が認められ、エロンガンAが特定の遺伝子の発現をのみ制御している可能性が示唆された。
2.新規転写伸長因子エロンガンA3の単離と機能解析
エロンガンAファミリーの新規メンバーであるエロンガンA3のcDNAを単離した。エロンガンA3は、エロンガンA同様に単独で転写活性を示すが、エロンガンAとは異なりエロンガンBCによる活性化を受けないことが判明した。そこで、BCによる活性化に必要な配列を同定するため、エロンガンA3とエロンガンAとのキメラ蛋白を作製して解析した結果、エロンガンAのC末端領域が重要であることが明らかになった。
3.エロンガンA結合蛋白の単離と機能解析
エロンガンAのN末端は試験管内転写には不要であるが、転写因子SllやCRSP70との相同性から、in vivoでの転写における役割が示唆されてきた。そこで、このN末端配列と会合する蛋白をTwo-hybrid法により探索した結果、Exonucleaseと相同な配列をC末端にもつ新規の分子EloA-BP1を単離された。EloA-BP1は汎組織性に発現し、エロンガンAと細胞核内で共局在することが判明した。EloA-BP1はエロンガンAやRNAポリメラーゼIIの試験管内転写伸長活性には影響を与えないことが判明したが、伸長段階における転写産物の校正等に関与している可能性がある。
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