| 研究課題/領域番号 |
13470102
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
法医学
|
|---|
| 研究機関 | 岡山大学 |
|---|
研究代表者 |
石津 日出雄 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (70033157)
|
|---|
| 研究分担者 |
吉留 敬 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (40304307)
宮石 智 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (90239343)
山本 雄二 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (30136379)
稲垣 幸代 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (00325086)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2001 – 2003
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
|
| 配分額 *注記 |
13,200千円 (直接経費: 13,200千円)
2003年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2002年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2001年度: 8,600千円 (直接経費: 8,600千円)
|
|---|
| キーワード | DNA多型 / 塩基多型(SNP) / ABO式血液型 / HLA-DRB1型 / 性染色体 / 多座位同時検出法 / 高速分析法 / キャピラリー電気泳動 / 一塩基多型(SNP) / 一塩基多型(SNPs) |
|---|
| 研究概要 |
本研究課題の研究経過および成績は以下に示すとおりである。
ABO式血液型、HLA-DRB1型、Y染色体上のSNP座位等の複数の多型DNA部位をPCRにより増幅し,それらの産物の一部を鋳型として、蛍光ラベルddNTPと各塩基置換部位(SNP)に対応した塩基長の異なる10本程度の非蛍光ラベルプライマーを用いた一塩基プライマー伸長反応により複数座位のSNPの同時分析を行った。次いで、プライマー伸長反応により得られた蛍光ラベルDNAフラグメントを、キャピラリー電気泳動装置(ABI PRISM 310 Genetic Analyzer)を用いて検出し、GeneScan Analysis Softwareを用いて解析することにより各SNP座位の塩基配列を決定した。
ABO式血液型遺伝子内の7個のSNPを本法により同時分析し、遺伝子型を明確に判定することが可能であった。また、この方法を法医学上の実際例に応用する際に問題となる検出感度、正確さ、加熱の影響等について検討し、良好な成績を得た。
Y染色体上の15座位のSNPを本法により同時の検出し、そのハプロタイプ解析が可能であった。
なお、HLA-DRB1遺伝子座のSNP検出については、DRB1座の各対立遺伝子を大きく3つのグループに分け、それぞれのグループ毎に複数のSNP部位を検出してHLA-DRB1遺伝子型をタイピングする方法について検討し、主要なDRB1対立遺伝子を総てのタイピングできる分析系をほぼ確立した。
さらに、ヒトの各染色体上の合計38個のSNP座位を5つの検出グループに分け、それぞれのグループ毎に一塩基プライマー伸長反応を行った後、時間差連続インジェクション法を採用したキャピラリー電気泳動により同時検出して38座位のSNPの遺伝子型を一度の電気泳動でタイピングする方法をほぼ確立した。また、この方法を法医学上の実際例に応用する際に問題となる検出感度、正確さ、加熱の影響等について検討し、良好な成績を得た。
|
