腫瘍抑制遺伝子の変異検出のための汎用型酵母アッセイの開発

• 研究課題/領域番号: 13470229
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 外科学一般
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 岡田 太 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助手 (00250423)
• 研究分担者: 藤堂 省 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60136463) ; 多田 光宏 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (10241316)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 11,700千円 (直接経費: 11,700千円); 2002年度: 5,300千円 (直接経費: 5,300千円); 2001年度: 6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
• キーワード: universal stop codon assay / yeast-based genetic diagnosis / ADE2 / truncating type mutation / tumor suppressor gene / yest-based genetic diagnosis / 腫瘍抑制遺伝子 / 汎用型酵母アッセイ法 / ストップコドンアッセイ

研究概要

本研究ではいかなる遺伝子にも即時対応可能な汎用型酵母ストップコドンアッセイの開発をめざした.
1.この目的を達成するため本研究では,1)被検遺伝子のPCR増幅の際に,線形化ベクターの両端部に一致する配列を付加する最適の方法を開発し,それによる相同組換えの効率と正確性を検証する.2)被検遺伝子産物がADE2活性中心に干渉する作用が被検遺伝子によっては現れる可能性があるのでそれを防ぐ最適なスペーサー配列を被検遺伝子とADE2の間に組み込む.3)完成した汎用型酵母ストップコドンアッセイで任意の遺伝子の変異検出が可能なことを実証する,という3段階の研究目標を設定,これらについて検討を行い,各条件を十分満足するアッセイを開発し,これの誌上発表を行った(Am J Pathol).
2.このアッセイをヒト癌サンプルに適用することにより,ヒト卵巣癌におけるE-cadherin遺伝子の変異を検出した.さらに本アッセイにて変異を同定する対象遺伝子を決定する研究の結果,肺癌におけるHOXD3(Int J Cancer),脳腫瘍におけるp73遺伝子(Brain Pathol),軟部組織肉腫におけるthymosin-beta4(Am J Pathol),骨肉腫におけるVEGF(Br J Cancer),肝細胞癌におけるTGF-beta receptor II(Cancer Immunol Immunother)などが対象遺伝子となることが明らかになった.現在これらの遺伝子について癌における変異検索を進めている.

研究成果

• [文献書誌] Kataoka A: "Development of a yeast stop codon assay readily and generally applicable to human genes"American Journal of Pathology. 159. 1239-1245 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hamada, J.: "Overexpression of homeobox gene HOXD3 induces coordinate expression of metastasis-related genes in human lung cancer cells"International Journal of Cancer. 93. 516-525 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nozaki, M.: "p73 is not mutated in meningiomas as determined with a functional yeast assay but p73 expression increases with tumor grade"Brain Pathology. 11. 296-305 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kobayashi, T.: "Thymosin-beta4 regulates motility and metastasis of malignant mouse fibrosarcoma cells"American Journal of Pathology. 160. 869-882 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kaya, M.: "Increased pre-therapeutic serum vascular endothelial growth factor in patients with early clinical relapse of osteosarcoma"British Journal of Cancer. 86. 864-869 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Zheo, W.: "Suppression of in vivo tumorigenicity of rat hepatoma cell line KDH-8 cells by soluble TGF-beta receptor type II"Cancer Immunol and Immunotherapy. 51. 381-388 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kataoka, A: "Development of a yeast stop codon assay readily and generally applicable to human genes"American Journal of Pathology. 159. 1239-1245 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hamada, J.: "Overexpression of homeobox gene HOXD3 induces coordinate expression of metastasis-related genes in human lung cancer cells"International Journal of Cancer. 93. 516-525 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nozaki, M.: "p73 is not mutated in meningiomas as determined with a functional yeast assay but p73 expression increases with tumor grade"Brain Pathology. 11. 296-305 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kobayashi, T.: "Thymosin-beta4 regulates motility and metastasis of malignant mouse fibrosarcoma cells"American Journal of Pathology. 160. 869-882 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kaya, M.: "Increased pre-therapeutic serum vascular endothelial growth factor in patients with early clinical relapse of osteosarcoma"British Journal of Cancer. 86. 864-869 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Zheo, W.: "Suppression of in vivo tumorigenicity of rat hepatoma cell line KDH-8 cells by soluble TGF-beta receptor type II"Cancer Immunol and Immunotherapy. 51. 381-388 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kataoka A: "Development of a yeast stop codon assay readily and generally applicable to human genes"American Journal of Pathology. 159. 1239-1245 (2001)
• [文献書誌] Hamada: "Over expression of homeobox gene HOXD3 induces coordinate expression of metastasis-related genes in human lung cancer cells"International Journal of Cancer. 93. 516-525 (2001)
• [文献書誌] Nozaki M: "p73 is not mutated in meningiomas as determined with a functional yeast assay but p73 expression increases with tumor grade"Brain Pathology. 11. 296-305 (2001)
• [文献書誌] Kobayashi T: "Thymosin-beta4 regulates motility and metastasis of malignant mouse fibrosarcoma cells"American Journal of Pathology. 160. 869-882 (2002)
• [文献書誌] Kaya: "Increased pr-therapeutic serum vascular endothelial growth factor in patients with early clinical relapse of osteosarcoma"British Journal of Cancer. 86. 864-869 (2002)
• [文献書誌] Zheo W: "Suppression of in vivo tumorigencity of rat hepatoma cell line KDH-8 cells by soluble TGF-beta receptor type II"Cancer Immunol and Immunotherapy. 51. 381-388 (2002)
• [文献書誌] Naka, M.: "Functional characterization of naturally occurring mutants (P405R and P425L) of p73alpha and p73beta found in neuroblastoma and lung cancer"Oncogene. 20. 3568-3572 (2001)
• [文献書誌] Kataoka, A.: "Development of a yeast stop codon assay readily and generally applicable to human genes"Am J Pathol. 159. 1239-1245 (2001)
• [文献書誌] Hamada, J-I.: "Increased oxidative DNA damage in mammary tumor cells by continuous epidermal growth factor stimulation"J. Natl. Cancer Inst.. 93. 214-219 (2001)
• [文献書誌] Ishikawa, S.: "Interaction of MCC2, a novel homologue of MCC tumor suppressor, with PDZ-domain protein AIE-75"Gene. 267. 101-110 (2001)
• [文献書誌] Tada, M.: "Inactivate the remaining p53 allele or the alternate p73? Preferential selection of the Arg72 polymorphism in cancers with recessive p53 mutants but not transdominant mutants"Carcinogenesis. 22. 515-517 (2001)
• [文献書誌] Tsuiki, H.: "Mechanism of hyperploid cell formation induced by microtubule inhibiting drug in glioma cell lines"Oncogene. 20. 420-429 (2001)
• [文献書誌] 多田光宏: "脳神経外科医に必要な分子生物学"生塩之敬・山浦晶・佐谷秀行編集. 14 (2001)