| 研究課題/領域番号 |
13470289
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
脳神経外科学
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| 研究機関 | 富山医科薬科大学 |
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研究代表者 |
林 央周 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (50283073)
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| 研究分担者 |
栗本 昌紀 富山医科薬科大学, 附属病院, 講師 (10161770)
遠藤 俊郎 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (70125269)
平島 豊 富山医科薬科大学, 医学部, 助教授 (30135016)
加藤 一郎 富山医科薬科大学, 医学部, 助教授 (50250741)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
13,800千円 (直接経費: 13,800千円)
2003年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2002年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2001年度: 9,200千円 (直接経費: 9,200千円)
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| キーワード | 先天性水頭症 / TGFβ / GFAP遺伝子 / アミノ酸変異 / トランスジェニックマウス / EGFP遺伝子 / 疾患モデル動物 / Creレコンビナーゼ / マイクロインジェクション / Creリコスビナーゼ / lox P / TGF-beta 1 / hydrocephalus / mouse / TGF-beta1 / transgenic mouse / embryo |
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| 研究概要 |
乳幼児水頭症の多くは先天性で、その成因や病態に関しては未だ未解明の点が多い。再現性の高い先天性水頭症のモデル動物はこれまでになかった。以前米国で作製されたTGFβトランスジェニックマウス(水頭症モデルマウス)は、継代が極めて困難であり安定的な供給は不可能であった。したがって水頭症の原因解明・新規治療法の開発には適切なモデル動物の開発が急務となっていた。本研究では、再現性の確かな水頭症のマウスモデル動物コロニーを世界に先駆けて確立しその解析を行うことを目標とした。平成15年度の研究は順調に進行し、以下のような研究成果をこれまでに得た。
(1)ヒトGFAP遺伝子のプロモーターエンハンサー領域1.9kbの下流にloxP配列、EGFP遺伝子、loxP配列、アミノ酸変異型TGFβ遺伝子を順につないだ合成DNAを作製した。この合成PNAをマウス受精卵雄性前核へ顕微鏡下注入したのち、仮親雌マウス(移植することによりトランスジェニックマウスGFAPloxEGFPloxTGFβ)をこれまでに3系統得た。
(2)全脳RNAを用いたノーザンブロット解析により、期待どおり3系統とも脳においてEGFP mRNAの発現が強く認められた。
(3)トランスジェニックマウス(GFAPloxEGFPloxTGFβ)とCreレコンビナーゼ発現トランスジェニックマウスを交配した。次世代においてEGFP遺伝子が段階的に除去されたトランスジェニックマウス(GFAPloxTGFβ)をこれまでに複数系統、ライン化することができた。
(4)本研究の結果、GFAPloxTGFβトランスジェニックマウスが安定的に確立された。本マウスを用いることにより脳におけるTGFβmRNA・蛋白の発現、胎生初期からの脳の水頭症病変を病理学的に検索することが今後はじめて可能になった。
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