| 研究課題/領域番号 |
13470367
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
眼科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
西田 幸二 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (40244610)
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| 研究分担者 |
田野 保雄 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (80093433)
渡辺 仁 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (60252673)
山本 修士 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (80294065)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
16,500千円 (直接経費: 16,500千円)
2002年度: 8,000千円 (直接経費: 8,000千円)
2001年度: 8,500千円 (直接経費: 8,500千円)
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| キーワード | 遺伝子治療 / 角膜ジストロフィ / レンチウイルスベクター / 細胞移植 / 遺伝子導入 / ノックアウトマウス / CHST6 / 角膜上皮幹細胞 / 培養角膜上皮シート / 斑状角膜ジストロフィ / トランスジェニックマウス / eGFP / 角膜発現特異的プロモーター / 角膜内皮 |
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| 研究概要 |
本研究では、遺伝性角膜疾患に対する根治的治療として、レンチウイルスベクターを用いた遺伝子治療の確立を目指した。レンチウイルスベクターは非分裂細胞、分裂細胞の両者に効率よく遺伝子導入ができ、永続的な発現が得られるベクターであり、近年、その安全性も飛躍的に向上している。本研究の結果、以下の成果が得られた。(1)角膜発現特異的プロモーターを開発した。我々がクローニングした斑状角膜ジストロフィの原因遺伝子CHST6のプロモーター部分を解析し、角膜特異的転写を促進するエンハンサー部位を発見した。このエンハンサーープロモーター部位を用いることにより、導入遺伝子の角膜特異的発現を行うことができることを示した。(2)原因遺伝子CHST6のノックアウトマウスを作製し斑状角膜ジストロフィの動物モデルを作製した。(3)遺伝子導入を併用した培養角膜上皮シート移植法を開発した。ヒトの角膜上皮幹細胞を培養し、移植できる重層化した培養角膜上皮シートを作成・回収することに成功するとともに、レンチウイルスベクターによってeGFP遺伝子を全層性に導入した培養角膜上皮シートを作製できることを示した。(4)レンチウイルスベクターによってex vivo角膜内皮細胞へ遺伝子導入を行うことができることを示した。特に本研究の大きな成果として、遺伝子導入を併用した角膜移植と自己培養角膜上皮シート移植法を開発したことが挙げられる。後者は患者の自己の角膜上皮幹細胞を採取し、in vitroで欠損遺伝子を導入して培養角膜上皮シートを作製し、この培養角膜上皮シートを患者に自家移植する治療法である。
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