| 研究課題/領域番号 |
13557226
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
白石 泰三 三重大学, 医学部, 教授 (30162762)
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| 研究分担者 |
登 勉 三重大学, 医学部, 教授 (60106995)
駒田 美弘 三重大学, 医学部, 教授 (80186791)
高尾 仁二 (高尾 仁ニ) 三重大学, 医学部, 助手 (30263007)
山森 俊治 (株)三菱化学BCL, 遺伝子解析部, 部長(研究職)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
12,900千円 (直接経費: 12,900千円)
2003年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2002年度: 4,200千円 (直接経費: 4,200千円)
2001年度: 5,600千円 (直接経費: 5,600千円)
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| キーワード | MTAP遺伝子 / 肺癌 / 白血病 / 化学療法 / PCR / 免疫染色 / MTAP / promoterのメチル化 / 非小細胞肺癌 / 定量的PCR法 / モノクロナール抗体 / 抗癌剤感受性試験 / Methylthioadenosine |
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| 研究概要 |
プリン代謝酵素Methylthioadenoisine phosophorylase(MTAP)欠損はT-ALL、非小細胞肺癌、脳腫瘍などの癌で報告されている。遺伝子欠失が原因である場合が殆どであるが、MTAP遺伝子の近傍に存在するp16はメチル化による発現制御を受けていることが知られている。我々は、MTAP promoterのメチル化によるMTAP欠損細胞株を経験した。従って、これまでに開発した定量的PCR法によるMTAP遺伝子欠失診断では不十分であると予想され、解析を行った。また、この欠損を利用し選択的癌化学療法の可能性を追求した。
モノクロナール抗体;免疫組織染色によるMTAPタンパク質の検出のために抗ヒトMTAP抗体の作製を開始した。大腸菌で発現したヒトMTAPタンパク質を用いてマウスを免疫した。血清中の抗MTAP抗体価をELISA法で測定し、高抗体価を示すマウスを得た。次いで、モノクローナル抗体の作製を試み、5クローンが高抗体価を示すことを確認した。
腫瘍組織の解析;real time PCRは原発性肺癌手術症例78例に施行し73例が評価可能だった。5例はcontrolとして測定したMTAP pseudogene(3q28)の欠損により測定不可能だった。32.9%(73例中24例)のMTAP遺伝子欠損を認めた。免疫染色はreal time PCRを施行した78例中72例に施行した。免疫染色では44.4%(72例中32例)が陰性だった。両法による測定を行った70例では、47例がreal time PCRでMTAP遺伝子正常であった。40例は免疫染色においてもMTAP陽性だったが、7例はMTAP陰性だった。23例はreal time PCR,免疫染色の両方で欠失ならびに陰性だった。Real time PCRではMTAP遺伝子正常で免疫染色でMTAP陰性だった7例においてはpromoter領域におけるmethylationが確認でき23.3%(30例中7例)が免疫染色においてMTAP欠失と判定できた。
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