| 研究概要 |
Pho85と結合する10種のサイクリンそれぞれとPho85との融合タンパク質をPho85の代りに発現する酵母株を作製し、その性質を調べた。その結果、PH05の発現抑制はPho85-Pho80、グリコーゲンの正常な代謝はPho85-Pc18をそれぞれ発現している株でのみ見られ、またcln1cln2二重欠失株ではPho85-Pcl1を発現している株だけが生育できることがわかった。これらの結果はPho85キナーゼの特定の機能には特定のサイクリンとの組み合わせが必要であることを示している。一方、Pho85-Pclを発現している株の中でPHO5の脱抑制が不完全なものが見られたが、PHO80を欠失させることにより完全な脱抑制が見られるようになった。また融合蛋白質のPho4に対するキナーゼ活性を調べたところ、Pho85-Pho80が最も強く、Pho85-Pcl8は最も弱かった。
PHO85およびPHO85-PCLを誘導発現する系を構築し、pho85 pho80二重欠失株中で発現誘導後、一定時間後にmRNAを抽出し、ジーンチップ解析を行い、PHO85およびPHO85-PCL融合蛋白質のimmediatetargetの探索を試みた。その結果、SW15およびそれにより制御されるCHS2,EGT2,PCL9、貯蔵糖代謝にかかわるTSL1,GSY1、Pho85のサイクリンであるPCL7、メタルセンサーであるCTR3などの発現量が上昇すること、また逆にMAK11,DSR1,PRS3などの発現量が減少することを見いだした。PHO85およびPHO80-PHO85発現誘導時で発現量が変化する遺伝子は多くの場合共通であったが、PCL7の発現上昇だけはPHO85の発現誘導時にのみ観察された。このことはPCL7の発現調節に必要なサイクリンはPho80以外のサイクリンであることを示している。現在残りの融合遺伝子について調べている。
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