| 研究概要 |
Neovasifuranone類は植物病原菌Neocosmospora vasinfecta NHL2298の生産する植物毒素である。無細胞系においてneovasifuranone A aldehyde (NFA aldehyde)がneovasifuranone A (NFA)に変換されることがこれまでの研究でわかっていた。本研究ではこの反応を触媒する還元酵素を調べ,この還元酵素が2種類存在すること,さらにそれぞれの酵素の分子量,至適pH,至適温度,Km値,Vmax値などを明らかにすることができた。また,これらの酵素のうち活性の強かった還元酵素-1について次のようにSDS-PAGE上でそのタンパクバンドを特定できるまで精製することができた。メチオニンを添加した麦芽培地上で,N.vasinfecta NHL2298株を24度,7日間静置培養した。得られた菌体より還元酵素を抽出し,遠心分離,DE52,Sephacryl S-300,TSKgel G3000SW, Mono Qカラムクロマトグラフィーで精製した。このフラクションをSDS-PAGEで分析したところ,分子量40kDa付近に1本の主要なバンドを認めた。この主要なバンドが目的の還元酵素-1であることを確認するために、native PAGEを行い,バンドのタンパク質がNFA aldehydeからNFAへの変換を触媒する還元酵素-1であることを確認した。
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