| 研究概要 |
ハンドウイルカのNADPH oxidase構成蛋白質(gp91^<phox>,p22^<phox>,p40^<phox>,p47^<phox>およびp67^<phox>)およびサイトカイン(IL-1α,IL-1β,IL-1ra,IL-4,IL-8,IFN-γおよびTNF-α)遺伝子について、陸棲哺乳類で保存性の高い領域をプライマーとしたRT-PCRを行い、増幅されたcDNAのクローニングを行った。その結果、イルカのNADPH oxidaseおよびサイトカインコード遺伝子は、いずれもウシと高い相同性(77.0〜95.4%)を示し、推定アミノ酸配列は陸棲哺乳類とほぼ同様であった。
イルカ好中球は、ホルボールエステルの刺激によってスーパーオキシドを産生し、その反応はNADPH oxidase阻害剤によって抑制されたことから、NADPH oxidaseによって活性酸素を産生することが明らかとなった。イルカ好中球の活性酸素産生に伴う呼吸バースト(RB)は様々な刺激物質により誘導されたが、ウシ好中球と同様にfMet-Leu-Pheに対しては反応しなかった。LPSおよび黄色ブドウ球菌で刺激したイルカ好中球の活性酸素産生量は、ウシおよびヒト好中球に比べて少ないことから、イルカ好中球は陸棲哺乳類の好中球に比べて細菌に対する殺菌活性が低いことが示唆された。
様々な受容体介在性刺激によって誘導されるイルカ好中球のRB活性は、組み換え型イルカTNFαによって濃度依存的に増強された。このTNFαによるプライミング作用は加熱処理によって失活し、ポリミキシンB処理では抑制されなかったため、大腸菌由来のLPSによるものではないことが確認された。以上より、海棲哺乳類においてもサイトカインが自然免疫の調節因子として作用していることが明らかとなった。
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