| 研究課題/領域番号 |
13670015
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
片岡 勝子 広島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (30034002)
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| 研究分担者 |
洲崎 悦子 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (10274052)
齋藤 育 (齊藤 育) 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (80346486)
野村 隆士 広島大学, 医学部, 助手 (20325161)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
2004年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2003年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2002年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2001年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
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| キーワード | 胃腸粘膜 / 細胞骨格 / 細胞間結合 / 微小管 / 上皮細胞 / 細胞極性 / γ-tubulin / HT-29細胞 / MTOC / HT-29 / 免疫組織化学 / カドヘリン / 閉鎖帯 / γ-チュブリン / 組織形成 / 腸上皮 / tubulin / 電子顕微鏡 / 免疫蛍光法 / 腸上皮細胞 / 上皮性培養細胞株 / 結合組織細胞 / α-tubulin / 免疫蛍光染色 |
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| 研究概要 |
十二指腸粘膜における微小管とゴルジ装置を組織化学染色して共焦点レーザー走査顕微鏡と電子顕微鏡で観察した。自由細胞では、微小管はゴルジ装置に包まれた微小管形成中心(MTOC、γ-tubulinが局在)から立体的に放射していた。上皮細胞では微小管は細胞長軸に平行に走り、特に核上部に多かった。γ-tubulinはゴルジ装置に一致して局在し、ゴルジ装置と関連した微小管の形成があることが示唆された。一方、酵母のγ-tubulinに対するモノクローン抗体G9は、上皮の3細胞間結合の部位(細胞質側)に特に強く結合した。微小管の保存がよくない場合にはこの結合性は消失した。これらのことは、3細胞間に特異的に発現する接着分子が存在し、その細胞質側にγ-tubulin様分子がついていることを示唆している。そこでG9の認識している分子のプロテオーム解析を進めた結果、2003年にマウスにおいて新規c-DNAから同定された分子Noxo 1(NADPH oxidase organizer 1)である可能性が示唆された。しかしNoxo 1と細胞間接着との関連性は、今のところ明らかではない。
ヒト結腸癌由来細胞株HT-29の細胞を単離し、微小管脱重合剤を作用させた後に通常培地を含む培養皿に撒くと、微小管は細胞軸に沿った平行な配列を早期に示す。次いでcadherinによる細胞間結合や細胞基底部のstress fiberが現れるが、細胞は重層化して増える。Butyrateで上皮細胞極性を誘導すると、細胞頂部特異的糖タンパクMUC-1を表面にもつ細胞内腔・細胞間腔が出現し、微小管はこれらの腔から放射するように見える。閉鎖結合の発達とともに細胞間腔は細胞に頂部になって単層上皮が完成し、微小管は細胞軸に沿った平行配列をとる。このことから微小管は細胞極性を早期に決めていることが明らかになった。
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