| 研究課題/領域番号 |
13670020
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 宮崎医科大学 |
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研究代表者 |
吉永 一也 宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (50136719)
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| 研究分担者 |
年森 清隆 宮崎医科大学, 医学部, 教授 (20094097)
谷井 一郎 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (40207171)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
500千円 (直接経費: 500千円)
2002年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
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| キーワード | 受精 / 微小注入 / 精子 / 先体内部タンパク質 / モノクローナル抗体 / 卵子 / 精子卵子相互作用 / 体外受精 / 先体反応 / 生殖生物学 |
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| 研究概要 |
精子先体acrosome内部に存在する4つの特異分子MN7(アクリン1)、MC41(アクリン2)、MC101(アクリン3)、MN9(エクアトリン)の受精における機能と生化学的性質を明らかにするための研究を行い、以下の成果を得た。
1.卵管内微小注入法によるMN9の生体内機能解析
我々が新たに開発した、抗体の卵管内微小注入法および体内受精実験を用いてMN9の生体内機能について調べた結果、MN9抗体投与群ではマウスの受精率および妊娠率ともに低下し、さらに未受精卵の囲卵腔に精子を確認した。これらのことから、MN9が実際の生体内で精子と卵子細胞膜との融合過程に重要な役割を担っていることが明らかとなった。なお、注入操作による着床胚へのダメージは認めなかった。また、同様の方法を用いて他の3つの抗体(mMN7,mMC41,mMC101)の作用について解析した結果、抗体は注入後少なくとも20時間、卵管膨大部に残存することを明らかにした。
2.MC41に対する卵子側分子の生化学的同定
MC41分子と卵子透明帯分子との相互作用について、MC41抗体によるFar-Western blotting法により解析した結果、MC41は75kDaのセリンプロテアーゼと複合体を菰成し、透明帯分子ZP2と結合することを証明した。また、MC41が先体反応初期に精子細胞膜と外先体膜の融合により菰成されるハイブリッド小胞に局在することを免疫電顕法により明らかにした。以上のことから、MC41が先体反応時、とくにマウス卵子透明帯との二次結合の初期段階に深く関与することを示した。
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