| 研究課題/領域番号 |
13670050
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生理学一般
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| 研究機関 | 福岡大学 |
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研究代表者 |
井上 真澄 福岡大学, 医学部, 助教授 (40223276)
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| 研究分担者 |
小川 皓一 (小川 浩一) 福岡大学, 医学部, 助教授 (60078780)
藤城 直二 福岡大学, 医学部, 助手 (30173420)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
2002年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2001年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | 副腎髄質細胞 / Ca貯蔵部位 / Naポンプ / αサブユニット / Ca取り込み / IP3受容体 / カテコールアミン / 分泌 / ウァバイン / Ca動員取り込み |
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| 研究概要 |
ラット副腎髄質細胞をコラーゲナーゼ処理により単離し、2%パラホルムアルデヒドにより固定した。免疫細胞化学的にIP3受容体の分布を調べた。タイプ2に対する抗体のみに明瞭な免疫反応が核周囲と細胞辺縁に観察された。副腎髄質の粗膜分画のイムノプロットにおいて、抗タイプ2抗体は約230KDaの蛋白を認識した。これらの結果から、副腎髄質細胞には主にIP3受容体タイプ2が核近傍と細胞辺縁に存在することが明らかになった。Naポンプαサブユニットの分布を同様に免疫細胞化学法及びイムノプロットを用いて調べた。約110Kdaのα1サブユニットは細胞膜の全周囲にわたって分布したが、α2は細胞膜の一部にしか分布せず、α3は存在しなかった。さらに、二重染色法によりα2免疫反応物が存在する細胞膜の直下の多くに、IP3受容体タイプ2が存在することが明らかになった。そこで、アンペリメトリー法を用いて細胞内Ca動員によるカテコールアミン分泌を測定し、低濃度ウワバインの分泌に対する影響を調べた。1μMウアバインにより主にα2サブユニットを抑制すると、細胞外Ca欠如液中でムスカリンにより誘発されるCa動員由来の分泌が、時間依存性に促進された。一方、静止時の分泌は1μMウワバインではほとんど変化せず、100μMウアバインの投与により増加した。以上の機能的及び形態的解析により、α2NaポンプがIP_3受容体タイプ2の分布する細胞膜直下のCa貯蔵部位へのCaイオンの取り込みに密接に関与していることが明らかになった。
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