| 研究課題/領域番号 |
13670114
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
村松 壽子 (村松 寿子) 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (50182134)
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| 研究分担者 |
村松 喬 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (00030891)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2002年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2001年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | ミッドカイン / コンドロイチン硫酸 / LRP / LDL受容体ファミリー / LRP6 / 過硫酸化 / インテグリン / プロテインシークエンス / シャペロン |
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| 研究概要 |
LDL受容体ファミリーに属するLRP6の細胞外ドメインをFLAGタグと結合させた組み換えタンパク質を作成し、ミッドカイン(MK)アガロースカラムにかけたところ、カルシウム依存性に強く結合した。この結合の強さはLRPとほぼ同様であった。LRP6はWnt受容体複合体の一成分であり、脳にも発現され、また、LRPとは細胞内ドメインが大きく異なっている。LRP6を介したMKのシグナル伝達の可能性が生じた。コンドロイチン-4硫酸6-スルホトランスフェラーゼをバキュロウィルスに生産させ、組み換え体酵素をヘパリンアガロースカラムクロマトグラフィーで高度に精製した。この精製酵素を用いて、コンドロイチン硫酸を母体にして、E構造、すなわち、N-アセチルガラクトサミンの4、6-ジ硫酸構造を形成した。このE構造を持つ人工コンドロイチン硫酸はMK-アガロースカラムクロマトグフフィーによりMKと強く結合することが明らかになった。すなわち、グルクロン酸の3-硫酸構造はMKへの強い結合に必要不可欠なものではないことが判明した。MKに結合する膜系タンパク質を13日マウス胚よりMK-アガロースアフィニティーカラムクロマトグラフイーで単離し、SDS-PAGEで分別後、トリプシン消化し、プロテインシーケンサーで配列を決定した。その結果、110kDaの結合タンパク質としてβ_1インテグリンが同定された。β_1インテグリンとMKの結合はカルシウム依存性であった。α鎖について検討すると、MK結合性のインテグリンはα_4β_1、およびα_6β_1であった。これらのインテグリンは精製後もMK結合性を保ち、直接MKと結合することが判明した。
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