| 研究課題/領域番号 |
13670209
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 浜松医科大学 |
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研究代表者 |
井原 勇人 浜松医科大学, 医学部, 助手 (00223298)
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| 研究分担者 |
浦野 哲盟 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50193967)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2003年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
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| キーワード | PAI-1 / レプチン / レプチン受容体 / 脂肪細胞 / 肥満マウス / 3T3-L1細胞 / 遺伝的肥満マウスob / ob |
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| 研究概要 |
脂肪細胞においてレプチン受容体シグナルによりPAI-1遺伝子発現が調節を受けているという仮説を検証すべく、我々は以下の実験を行った。
1.組換えレプチンの遺伝的肥満マウスob/obへの短時間投与による血中PAI-1量及び脂肪組織のPAI-1 mRNA量の解析:
レプチン投与群では、6時間後にはコントロール群に比べ有意に血中PAI-1値が減少した。これに呼応するように内臓脂肪組織でのPAI-1 mRNA量もコントロール群に比べ有意に減少した。皮下脂肪組織や比較的PAI-1 mRNAが多く発現している肺組織においてもレプチン投与により、6時間、24時間後共にPAI-1 mRNA発現量の低下が認められた。
2.前駆脂肪細胞3T3-L1を用いたレプチン強制発現によるPAI-1遺伝子発現に与える影響:
5PAI-1転写調節領域/ルシフェラーゼ(5 PAI-1/Luc)レポーターベクターとレプチン発現ベクターを共トランスフェクションするとレプチン発現ベクター量依存的にLucを指標としたPAI-1遺伝子転写活性を抑制した。
3.PAI-1遺伝子発現調節領域におけるレプチン応答抑制配列の同定:
5 PAI-1転写調節領域を順次-1147から-166 bpまで欠失させたいずれのレポーターでもレプチン発現ベクターを共発現したものでは、空ベクターを共発現させたものより有意にLuc活性は低下した。-166 bpよりも下流の配列が重要であると思われる。
4.レプチン受容体アイソフォームの役割の検討:
脂肪細胞にはレプチン受容体のロングフォーム(LF)とショウトフォーム(SF)が存在しているが、このどちらの型の受容体がPAI-1発現抑制に関与しているかを検討した。空ベクターのみをトランスフェクションしたときの転写活性を100%とした場合、SFとレプチン発現ベクターの組合せでは70〜75%に低下し、予想に反し、LFとレプチンの組合せでは、180〜200%の転写活性上昇が認められた。以上の事から、PAI-1遺伝子発現抑制に関わるのはショウトフォーム受容体であり、MAPK系シグナルが関与する事が示唆された。
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