| 研究課題/領域番号 |
13670325
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
免疫学
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
桑野 剛一 久留米大学, 医学部, 教授 (60215118)
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| 研究分担者 |
木田 豊 久留米大学, 医学部, 助手 (30309752)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2001年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | granulysin / クローニング / PCR / 転写因子 / AP-1 / Acholeplasma / THP-1 / transcription |
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| 研究概要 |
マウスの脾臓および小腸のRNAより.cDNAライブラリーを作成し、ヒトgranulysinをプローブとして、ハイブリダイゼーションによってマウスgranulysinクローンの検出を試みた。cDNAライブラリーから数個の陽性クローンを得て、塩基配列の検討を行ったが、ヒトgranulysinとホモロジーを示すクローンは存在しなかった。次にRT-PCRによるクローニングを行った。PCRプライマーとして、ブタgranulysinとホモロジーが高い塩基配列、およびヒトgranulysinの活性型9kDaの領域をカバーする塩基配列を用いた。テンプレートとして、種々の臓器由来のtotal RNAを用いた。RT-PCR後、増幅産物の塩基配列を決定したが、ヒトgranulysinとホモロジーを示すクローンは存在しなかった。さらに、granulysinのプロモーター領域をブローブとして、マウスのゲノムライブラリーからサザンハイブリダイゼーションによりホモログの検出を試みた。しかし、granulysinと相同性を示す領域は存在しなかった。これらの結果から、マウスgranulysinの発現は極めて低いので、現時点では検出できなかったと考える。事実、マウスのデータベース上、まだマウスgranulysinの報告はない。
上記の実験に加えて、ヒトgranulysinの転写レベルにおける発現制御の解析、およびgranulysinの抗菌活性ドメインの合成ペプチドを作成して、その機能解析を行った。その結果、マイコプラズマの刺激により、granulysin mRNAの発現が増強し、転写因子AP-1がヒトgranulysinのプロモーターを活性化に非常に重要であることが明らかとなった。また、granulysinのアミノ酸残基(32〜42)の合成ペプチドはグラム陽性菌、グラム陰性菌に対して広い抗菌活性を示すことを観察した。
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