辺縁帯形成におけるcyctatin A架橋メカニズムとその役割

• 研究課題/領域番号: 13670860
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 皮膚科学
• 研究機関: 旭川医科大学
• 研究代表者: 高橋 英俊 旭川医科大学, 医学部, 講師 (00216748)
• 研究分担者: 伊藤 康裕 旭川医科大学, 医学部, 助手 (90332486)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2003
• 研究課題ステータス: 完了 (2003年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2003年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円); 2002年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: cystatin A / 辺縁帯 / 44リジン / 架橋 / 角化細胞 / 置換 / mutation / 分化 / GSH / GFP / 皮膚 / 遺伝子調節 / MAPK / ERK / JNK

研究概要

我々が保有しているhuman cystatin A cDNAをGST遺伝子の下流につないだ大腸菌発現ベクターを作製し、合成蛋白を作製した。western blot法によりcystatin Aが発現されていることを確認後、GSTカラムおよびトロンビンにて合成cystatin Aを生成した。
次に、合成cystatin A蛋白をトタンスグルタミネース(宝酒造より購入)によりin vitroで反応、反応産物をSDSページにより検討したところ2から4merのcystatin A産物の形成を認め、cystatin Aがトタンスグルタミネースにより架橋させる確認された。
さらに、次に、cystatin A遺伝子内のグルタミン、リジン塩基をin vitro mutagenesis kitを用いて18種の他の塩基に置換させた合成cystatin Aを用いて架橋の有無について検討した。44アミノ酸残基のリジンを他の塩基に置換させた産物のみがが架橋できなかった。また、18種のクローンを角化細胞に導入し、辺縁帯形成を誘導後cystatin A抗体を用いて架橋状態を検討したところ、44アミノ酸残基のリジンを他の塩基に置換させた産物のみ細胞膜に架橋されず、細胞質内にとどまっていることが確認された。以上の結果から44アミノ酸残基のリジンがが架橋に重要であることが解明された。

研究成果

• [雑誌論文] 1,25-dihydroxyvitaminD3 increases human cystati A expression by in hibiting the Raf-1/MEK1/ERK signaling pathway of keratinocytes. (2003)
  • 著者名/発表者名: Takahashi H
  • 雑誌名: Arch Dermatol Res 295 ページ: 80-87
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] 1,25-dihydroxyvitaminD3 increases human cystati A expression by inhibiting the Raf-1/MEK1/ERK signaling pathway of keratinocytes. (2003)
  • 著者名/発表者名: Takahashi H et al.
  • 雑誌名: Arch Dermatol Res 295 ページ: 80-87
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Similary potent action of1,25-dihydroxyvitamin D3 and its analogues, tacalcitol, calcipotriol, and maxacalcitol on normal human keratinocyte proliferation and differentiation"J Dermatol Scie. 31. 21-28 (2003)
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "1,25-dihydroxyvitamin D(3) increases human cystatin A expression by inhibiting the Raf-1/MEK1/ERK signaling pathway of keratinocytes"Arch Dermatol Res. 295. 80-87 (2003)
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Expression of human cystatin A by keratinocytes is positively regulated via Ras/ERK/MEKK1/MKK7/JNKsinnal transduction pathway but negatively"J.Biol Chem. 276. 36632-36638 (2001)
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Transcriptional factor AP-2 gammma increases human cystatin A"Biochem Biophys Res Commun. 278. 719-723 (2000)
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Aberrant expression of apoptosis-related molecules psoriatic epidermis"J Dermatol Scie. 28. 187-197 (2002)
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Similary potent action of 1,25-dihydroxyvitamin D3 and its analogues, tacalcitol, calcipotriol, and maxacalcitol on normal human keratinocyte proliferation and differentiation"J Dermatol Scie. (in press).
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Expression of human cystatin A by keratinocytes is positively regulated via Ras/ERK/MEKK1/MKK7/JNKsinnal transduction pathway but negatively"J. Biol Chem. 276. 36632-36638 (2001)
• [文献書誌] H.Takahashi et al.: "Transcriptional factor AP-2 gammma increases human cystatin A"Biochem Biophys Res Commun. 278. 719-723 (2000)