| 研究課題/領域番号 |
13670866
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
皮膚科学
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
小林 孝志 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (90234830)
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| 研究分担者 |
輪千 浩史 星薬科大学, 薬学部, 講師 (50318614)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2002年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2001年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | マトリックスメタロプロテアーゼ-9 / アポトーシス / 分化 / 転写因子 / ケラチノサイト / 線維芽細胞 / HT-1080細胞 / In situザイモグラフ法 / マトリックスメタロプロテアーゼ / matrix metalloproteinase-9 |
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| 研究概要 |
MMP-9遺伝子promoter KRE-M9領域に結合するdifferentiatin repressing factor (DRF)-1と、KRE-M9近傍に存在するTRE結合AP-1蛋白のc-Junとの構造的類似性が判明、one-hybrid法から得たDRF-1候補(以下D候補)はスプライシングによりα、βとして存在、D候補遺伝子導入培養293T細胞でKRE-M9結合性の約80kDa核蛋白と細胞質蛋白量が増加した。アポトーシスでのMMP-9発現検討の結果、1、培養ケラチノサイト(以下KC)でD候補β遺伝子導入によりザイモグラフ法でMMP-9発現を抑制した。2、分化誘導高Ca^<2+>刺激KCで、(1)D候補が核から細胞質に移動、MMP-9発現を誘導、(2)再び低Ca^<2+>でD候補が核に移動、MMP-9発現を抑制、(3)核内phospho-c-Jun、DNA断片化、TUNEL染色陽性はこれまで検出されず、培養液soluble Fas ligand濃度も有意な変化を認めなかった。3、炎症やアポトーシス誘導TNF-αとIL-1α、分化誘導TGF-β刺激KCで、(1)MMP-9発現を誘導、(2)D候補の細胞質への移行傾向を認め、(3)phospho-c-JunをTNF-α、IL-1α刺激後核に検出、(4)Luciferase assayよりTNF-α、IL-1αで高Ca^<2+>と同様KRE-M9がMMP-9発現誘導に関わることが判明した。4、RT-PCR法から、APAF-1は以上の刺激KCでこれまで検出されず、TGF-βやTNF-α刺激KCでtissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP)-2発現増加を認めた。5.紫外線(UVB)照射KCで、(1)強度依存的にMMP-9とinvolucrinとの発現誘導を認め、(2)phospho-c-Junを核に検出、D候補の細胞質への移行傾向を認め、(3)生細胞数の強度依存的減少、annexin V陽性細胞を認めた。6、培養間葉系HT-1080細胞に加え線維芽細胞でもDRF-1を認め、TNF-αやTGF-β刺激でMMP-9分泌誘導を認めた。7、In situザイモグラフ法で有棘細胞癌の腫瘍浸潤部、異常角化部にゼラチン分解活性を検出、MMP阻害1,10-phenanthrolineで活性阻害された。結論として、早期アポトーシスにMMP-9が関与、この発現をD候補が抑制することが示唆された。
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