| 研究課題/領域番号 |
13671096
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
腎臓内科学
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
小山 哲夫 筑波大学, 臨床医学系, 教授 (80111384)
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| 研究分担者 |
山縣 邦弘 筑波大学, 臨床医学系, 助教授 (90312850)
平山 浩一 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10302423)
室 かおり 筑波大学, 臨床医学系, 助手 (60301082)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
2002年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2001年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | IgA腎症 / モデル動物 / Th1 & Th2 cells / Staphylococcus aureus / monoclonal Abs / Th1 ＆ Th2 cells / 免疫遺伝学的背景 |
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| 研究概要 |
(1)BALB/C mouse(Th2 type)とB/6 mouse(Th1 type)を抗原とS.aureusの膜成分をFreund incomplete adjuvantと共に2週毎に皮下に免疫した.免疫後4、8、12、16,24週目に屠殺した.
(a)BALB/C mouseでは周齢が高くなるにつれ、糸球体メサンギウムにIgG, IgA, C3抗体、ならびにS.aureus抗原の沈着が増加した.(b)産生された抗体をヒトHGGでprotein Aで吸収した膜抗原をcoateしたELISA法で測定したところ、対照群に比して有意に抗S.aureus抗体(IgGおよびIgA)の上昇をみた.(c)光顕では軽度～中等度のメサンギウム増殖性腎炎が発症した.(d)一方対照群のB/6群では軽度の免疫グロブリンの沈着を認めるも、S.aureus抗原の局在は認めなかった.
(e)BALB/c mouse群では対照群に比して、有意に多量の蛋白尿を認めた.
(f)BALB/mouse免疫後の脾細胞にS.aureus抗原を加え、培養したところ、有意に抗S.aureus IgA抗体の上昇を認めた.
(2)抗S.aureusに対するmouse monoclonal antibodyの作成:PG法によりBALB/Cの脾細胞とNS1とhybridomaを作成し、モノクローナル抗体を得た.この抗体を用いて、ヒトIgA腎症患者の組織中のS.aureus抗原を確認すると同時に、S.aureus菌体成分に対するwestern blotを行い、34kDaのバンドと反応することを確認した.
(3)抗S.aureus抗体を用いて、免疫沈降法で得られた抗原のアミノ酸配列を検討し、S.aureus膜成分の一部であることを確認した.
以上の結果から、S.aureus膜抗原を用いたmouse IgA腎症類似病変の惹起には、Th2 typeの免疫遺伝学的背景を有することが重要である。今後IgAへのクラススイッチ機序、大腸菌に発現させた抗原を用いた抗原を用いた動物実験等を検討する予定である.
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