| 研究概要 |
細胞の分化増殖、発生、免疫に関与するTGF-βは、病的過剰状態において、組織の硬化や線維化に重要な役割を果たす.我々は,動物腎硬化モデルでTGF-β発現が増加することやヒトのIgA腎症では,尿中TGF-βの排泄が増加することを明らかにしてきた.TGF-βの細胞内情報伝達分子Smadには、特異型(Smad2/3)、共有型(Smad4)、抑制型(Smad6/7)がある.特異型Smad系の標的遺伝子の特異的プロモーターであるSmad binding element(SBE)の下流域に、ルシフェラーゼ遺伝子を挿入した合成遺伝子(SBE-Lux)を用いて、次のような実験を行った。SBE-Luxを培養細胞に遺伝子導入し、TGF-βの濃度依存性にLux活性が上昇することを明らかにした。また培養細胞にSBE-Luxを遺伝子導入し,同時にAGEなど,既知のTGF-β誘導物質を添加すると,ルシフェラーゼ活性が増加するから,これらの物質がTGF-β/Smad系を刺激することが明らかにした.
SBEの下流に蛍光発色物質であるGFP蛋白を結合させた合成遺伝子を作製した。これによってTGF-βの標的細胞を可視化することを考案し,培養細胞においては,TGF-β刺激下に可視化することができた.しかし,既知のTGF-β誘導物質による刺激ではGFP発色の有意な増加は認められなかった。これを障害された組織に遺伝子導入した場合も同様であった.Luxの発現やGFPの発色には,10-2ng/ml以上のTGF-βの濃度が必要であり,このような高濃度のTGF-βは,生理的には勿論,病的状態においても存在しないと考えられる.今後,低濃度のTGF-βに反応する,プロモーターを合成する必要があると考えられた.
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