| 研究課題/領域番号 |
13671322
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器外科学
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
渡会 伸治 横浜市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (10244477)
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| 研究分担者 |
林崎 良英 理化学研究所, ゲノム科学総合研究センター, プロジェクトディレクター (70192705)
石川 孝 横浜市立大学, センター病院・総合外科, 講師 (80275049)
岡崎 康司 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (80280733)
窪田 徹 横浜市立大学, 医学部, 助手 (10315773)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
2003年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2001年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
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| キーワード | liver failure / liver regeneration / cDNA microarray / apoptosis / hepatectomy / cDNA microarra |
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| 研究概要 |
Wistar系雄生8〜12週齢ラットを用い、肝切除率90%、95%のモデルと、対照としてのsham operationモデルをそれぞれ作製した。肝切除後経時的(1,3,6,12,24時間)にラットを犠牲死させ、残肝を採取、AGPC変法にてTotal RNAを抽出、oligo-dT primerとCy3-dUTP、Cy5-dUTP、super script II reverse transcriptaseを用いmRNAをcDNAに逆転写、ラベリングを行った。それぞれの肝切除群と、対照群よりラベリングしたprobe cDNAを競合的にmouse 40K microarrayにハイブリダイゼーションさせる。Microarrayのsignalをscanningし、Cy3、Cy5のsignal intensityをそれぞれ定量的に測定し、肝切除群と対照群の遺伝子発現プロファイルの差異の情報を得た。Gene-Spring(silicon genetics社)クラスター解析プログラムを用いて、遺伝子発現の変化を解析した。
その結果95%(過大量)肝切除モデル群は90%(許容量)肝切除モデル群と比較し、apoptosis関連因子では、Fas, caspase8、IL-18の早期よりの高発現とBcl-2の低発現を認めた。cell proliferation関連因子ではp21の早期からの高発現を認めた。HSPは全体に低発現であった。
さらに、肝再生メカニズムを調べるために、マウス70%肝切除モデルを用いて、同様のcDNAマイクロアレイ解析を行った。その結果、IEgeneとしてIRAK-1やKaryopherin、S期進行に関わる新規遺伝子としてID-2,ID-3,GADDγなどを同定することができた。これらの遺伝子を操作し、新しい肝不全メカニズムの解析に応用したいと考えている。
これらを第104回日本外科学会総会に発表し、後者の実験はJ.Hepatologyに本年3月に掲載された。
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