研究課題/領域番号 |
13671579
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 一般 |
研究分野 |
麻酔・蘇生学
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研究機関 | 神戸大学 |
研究代表者 |
三川 勝也 神戸大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (40229662)
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研究分担者 |
仁科 かほる 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (20311780)
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研究期間 (年度) |
2001 – 2003
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研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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配分額 *注記 |
2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
2003年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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キーワード | 急性肺傷害 / アポトーシス / 肺胞上皮細胞 / フォスフォジエステラーゼ阻害薬 / ブレオマイシン / エンドトキシン / 血管内皮前駆細胞 / 好中球 / 急性肺障害 / 血管内皮細胞 / 再生医学 / 増殖因子 |
研究概要 |
まず、ヒト末梢血からCD34抗体陽性細胞を免疫ビーズ法で単離し血管内皮特異的培地(EBM-2培地+VEGF+FBS+IGFなど)にて増殖させることにより血管内皮前駆細胞に分化・誘導することを示した。血管内皮前駆細胞は形態的観察及び内皮細胞の表面抗原(Flk-1,CD34,VEカドヘリン)の発現をフローサイトメトリーにて確認した。またARDSの病態における血管内皮前駆細胞の関与を明らかにするためにエンドトキシン及びブレオマイシンによるラット急性肺傷害モデルを用いて肺傷害の自然経過として血管内皮の傷害肺での動態を内皮細胞の表面抗原を免疫組織学的に検討して評価した。ブレオマイシンモデルでは血管の増殖が認められたがエンドトキシンモデルでは殆ど認められなかった。次に肺胞上皮修復治療の基礎実験としてラット培養肺胞II型上皮細胞を用いPDE-IV阻害薬であるロリプラム及びケタミン、リドカイン、プロポフォール、ミダゾラム(臨床血中濃度〜100倍濃度)の細胞増殖に与える影響をBrdU取り込み法とMTT改良法で評価したところ増殖因子(KGFやHGF)の存在下でも非存在下においてものロリプラムは肺胞II型上皮細胞の増殖を亢進した。ラット培養線維芽細胞に対するロリプラム、ケタミン、リドカイン、プロポフォール、ミダゾラムの影響を検討したところこれらの薬剤は増殖効果を示さなかった。また57BLマウスにロリプラムおよびKGFを投与し肺胞II型上皮細胞の増殖に対する効果(BrdU uptake)も検討した。このin vivo実験ではロリプラムの腹腔投与により肺胞II型上皮細胞におけるBrdUの取り込みが増加していた。分離肺胞II型上皮細胞を用いてアポプロテイン(SP-B)産生に対するロリプラムの影響を調べたところSP-B mRNAの発現を亢進した。さらにin vivo実験としてエンドトキシンによる肺胞II型上皮細胞のアポトーシスに対するロリプラム及びプロポフォール・リドカイン・ミダゾラム・ケタミンの影響を調べたところアポトーシスをロリプラムとプロポフォールが抑制した。
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