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膀胱粘膜再構築培養モデルでの癌浸潤における血管新生の証明

研究課題

研究課題/領域番号 13671657
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 泌尿器科学
研究機関佐賀大学(医学部)

研究代表者

中島 啓二 (2003)  佐賀大学, 医学部, 助手 (00346884)

藤山 千里 (2001-2002)  佐賀医科大学, 医学部, 講師 (80209113)

研究分担者 南里 正晴  佐賀大学, 医学部, 助手 (80346890)
真崎 善二郎  佐賀大学, 医学部, 教授 (40038716)
中島 啓二  佐賀医科大学, 医学部, 助手 (00346884)
塚原 常宏  佐賀医科大学, 医学部, 助手 (70315208)
研究期間 (年度) 2001 – 2003
研究課題ステータス 完了 (2003年度)
配分額 *注記
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2003年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2002年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2001年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワード細胞培養 / 膀胱癌 / 尿路上皮 / 新生血管 / コラーゲン / 血管内皮細胞 / 線維芽細胞 / 血管内皮細胞増殖因子
研究概要

われわれが開発した三次元再構築細胞培養法を用いて、膀胱癌において新生血管が癌浸潤に及ぼす影響を組織学的におよび経時的に証明しようと試みた。
まず、ブタ膀胱から線推芽細胞と移行上皮細胞を分離し、コラーゲンゲル内に線維芽細胞を包理後その上で移行上皮細胞を単層培養した。この結果、移行上皮は重層化し、基底層、中間層、被蓋層と層分化も良好であった。
この再構築した粘膜固有層上で、ヒト膀胱癌株(HT-1197.HT-4,T24)細胞を単層培養したHT-1197細胞は再構築した粘膜固有層に浸潤増殖していたRT-4,T24細胞は粘膜固有層上に増殖していた。次に血管内皮細胞を線維芽細胞と共にコラーゲンゲル内に包理して再構築培養したところ、線維芽細胞だけの培養結果と同様であった。EGFを添加してみたが増殖は見られず、in vitro上で血管新生を再現することは出来なかった。
そこで、三次元培養で作製した膀胱癌上皮シートをラットに移植してin vivoにおける血管新生を組織学的に検討した。しかし移植後数日でマウスが死亡し、剖検しても癌細胞の生着は認められなかった。
再度in vitroにて再構築した粘膜固有層上でヒト膜脱癌株細胞の培養を行い、VEGF蛋白の発現を検討したが、VEGF蛋白の発現を証明できなかった。また、各膀胱癌細胞VEGF分泌量を測定したが、コントロール群と比較して有意差はみられなかった。各癌細胞蛋白中のHif-1α、thymidine phosphorylaseの発現をwestern blotting法で同定したが、発現はみられなかった。
今回の実験系では膀胱癌の癌浸潤における血管新生を証明することは出来なかったため、新たな実験系の開発が必要と思われた。

報告書

(4件)
  • 2003 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2002 実績報告書
  • 2001 実績報告書
  • 研究成果

    (13件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (13件)

  • [文献書誌] K.Nakamura: "Bladder cancer cell implantation in reconstructed bladder in vitro : a model of tumor recurrence"British Journal of Urology International. 89. 119-125 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 塚原常宏: "In vitro 人工尿路上皮作製の試み"日本小児泌尿器科学会雑誌. 11・1. 63 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Zhenxian du: "Hif-la protein expression in human normal, benign and malignant prostate"日本泌尿器科学会雑誌. 94・2. 383 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 塚原常宏: "In vitro 人工尿路上皮再構築の試み"日本泌尿器科学会雑誌. 94・2. 367 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Du Zhenxian: "Expression of hypoxia inducible factor 1α in human normal, benign and malignant prostate tissue"Chinese Medical Journal. 116・12. 1936-1939 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 藤山千里: "人工尿路上皮再構築の試み"日本泌尿器科学会雑誌. 95・2. 148 (2004)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Nakamura: "Bladder cancer cell implantation or reconstructed bladder in vitro : a model of tumor recurrence"British Journal of Urology International. 89. 119-125 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Du Zhenxian: "Expression of hypoxia, inducible factor 1α in human normal, benign and malignant prostate tissue"Chinese Medical Journal. 116(12). 1936-1939 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 藤山千里: "人工尿路上皮再構築の試み"日本泌尿器科学会雑誌. 95(2). 148 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] K.Nakamura, C.Fujiyama, Y.Tokuda, H.Sugihara, Z.Masaki: "Bladder cancer cell implantation in reconstructed bladder in vitro : a model of tumour recurrence"British Journal of Urology International. 89. 119-125 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] 塚原常宏, 藤山千里, 真崎善二郎: "In vitro人工尿路上皮作成の試み"日本小児泌尿器科学会雑誌. 11・1. 63 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Zhenxian du: "Hif-la protein expression in human normal, benign and malignant prostate"日本泌尿器科学会雑誌. 94・2. 383 (2003)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] 塚原常宏, 藤山千里, 真崎善二郎: "In vitro人工尿路上皮再構築の試み"日本泌尿器科学会雑誌. 94・2. 367 (2003)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書

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公開日: 2001-04-01   更新日: 2016-04-21  

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