| 研究概要 |
p120 RasGAPは,低分子量Gタンパク質Rasに特異的に作用し,そのGTP加水分解活性を促進するエフェクター因子である.Rasを不活性化するこの酵素作用は,Rasのもつ細胞増殖や分化といった機能を制御するのに大変重要である.本研究では,RasGAPのnSH2-SH3-cSH2領域における分子内活性制御機構の詳細な解析を進めるために,SH2およびSH3ドメインを1単位として調製した組み換え型RasGAPタンパク質とその標的タンパク質であるp190 RhoGAPのpTyr領域を含む合成ペプチドとの結合をSPR測定により速度論的に解析した.
最初に,RasGAPの2つのSH2領域とRhoGAPの2つのpTyr領域とのそれぞれの結合をBiacoreを用いて解析し,各ドメイン間の相互作用の重要性を比較した.その結果,nSH2【tautomer】pTyr1105領域の方がcSH2【tautomer】pTyr1087領域より約30倍強く結合することが分かった.また,nSH2【tautomer】pTyr1087領域およびcSH2【tautomer】pTyr1105領域の結合を調べてみると,この組合わせでも結合が示され,nSH2が関与したnSH2【tautomer】pTyr1087領域の方がcSH2【tautomer】pTyr1105領域よりも約40倍強かった.これらの結果から,複数の組合わせた相互作用によるシグナル伝達の制御機構が示唆された.さらに,RasGAPタンパク質の中央部SH3領域がRhoGAPとの相互作用に影響を与えていないことを確認した後,RasGAP nSH2-SH3-cSH2とpTyr1105領域およびpTyr1087領域を両方含むRhoGAPペプチドとの結合を調べたところ,非常に強い結合が観測され,2つの結合部位による相乗的な効果が認められた.以上の結果から,RasGAPを中心としたシグナル伝達のネットワークの存在が予想された.
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