| 研究課題/領域番号 |
13672432
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
井原 征治 東海大学, 医学部, 助教授 (50096202)
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| 研究分担者 |
竹腰 正孝 (竹腰 正隆) 東海大学, 医学部, 講師 (80221373)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2002年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2001年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | HLA / B51 / DR9 / 組み換えヒト抗体 / Fab / ハイブリドーマ |
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| 研究概要 |
人工ヒト抗体の作製研究に取り組んでいる。本申請研究の課題は、人工抗HLAヒト抗体の作製である。臓器移植、親子鑑定、疾患分析でおこなわれているHLA class I, IIのタイピングにはヒト血清が使用されるが、ヒト血清はモノクローナルではないために交差反応が起き、結果が鮮明でないことがある。さらに、大部分の血清が経産婦から得るため、特異性・親和性に優れたもの、希少HLAタイプを認識する血清などの確保は難しい。
本研究では、ファージディスプレイ法で構築したPCR用プライマーおよび発現ベクターを使用して、抗HLA class I B51,およびclass II DR9抗体の作製を目指した。
方法は、まずHLA class I B51抗体陽性者およびclass II DR9抗体陽性者のB細胞にEBVを感染して細胞を不死化する。その後B51抗体に関してはハイブリドーマ法でB51ヒト抗体産生細胞を樹立し、また、class, II DR9に関してはEBV感染細胞から目的抗体産生細胞を分離した。次に、これらの細胞からRNAを抽出し、これを材料に抗体遺伝子のFab領域の増幅とクローニングを行って抗体遺伝子を保存し、かつ、大腸菌でFab抗体を発現させた。最後に、得られた組み換えヒト抗体の特異性について分析を行った。
陽性FabクローンのL鎖、H鎖のDNA塩基配列、および発現した抗原のWestern blot法による分析で、B51抗体のサブクラスはヒトIgM/λ、DR9はIgM/κであった。B51組換えFab抗体を発現・精製し、表面抗原の異なる白血球を使用してAHG-LCT法およびFACScan解析で分析した結果、FabクローンはB51抗原陽性の白血球に特異的に反応する事が判明した。DR9抗体に関しては、クローニング発現・精製は行った。血球を使用した分析は計画中である。
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